Pseudomonas syringae mok1からのフィターゼ遺伝子（phy m）の分子クローニング

フィターゼ遺伝子（PHY M）は、縮退したPCRと逆PCRの2つのステップで、Pseudomonas syringae Mok1からクローン化されました。この遺伝子は1,287ヌクレオチドで構成され、46,652 kDaの推定分子量を持つ428アミノ酸のポリペプチドをコードします。そのアミノ酸配列に基づいて、Phy Mは、通常、ヒスチジン酸ホスファターゼが飢villyを特徴とする活性部位rhgxRXPおよびHD配列モチーフを共有します。独自のシグナル配列（PEPSS）を使用して成熟したPhy mをコードする各PHY M遺伝子フラグメント（PEPSM）をE. coli BL21（DE3）発現ベクター、PET22B（+）にサブクローニングしました。クローンPEPSMの粗抽出物における酵素活性は、タンパク質の2.514 UMG（-1）であり、クローンPEPSSのそれよりも約10倍高い。

A phytase gene (phy M) was cloned from Pseudomonas syringae MOK1 by two steps of degenerate PCR and inverse PCR. This gene consists of 1,287 nucleotides and encodes a polypeptide of 428 amino acids with a deduced molecular mass of 46,652 kDa. Based on its amino acid sequence, the Phy M shares the active site RHGXRXP and HD sequence motifs, typically characterized by histidine acid phosphatases familly. Each phy M gene fragment encoding mature Phy M with its own signal sequence (pEPSS) and without (pEPSM) was subcloned into the E. coli BL21 (DE3) expression vector, pET22b (+). The enzyme activity in crude extracts of clone pEPSM was 2.514 Umg(-1) of protein, and about 10-fold higher than that of clone pEPSS.