食道腺タンパク質をコードするルートノット線虫遺伝子へのRNA干渉の適用

これまでのところ、植物寄生性線虫は、変換または突然変異誘発に抵抗性でした。線虫遺伝子の機能分析は、これらの必須の寄生虫に適応した逆遺伝子ツールの開発に依存しています。ここでは、線虫の腹部食道腺で発現し、寄生虫症に潜在的に関与するカルレチクリン（MI-CRT）に潜在的に関与する2つの遺伝子のノックダウンのために、ルートノット線虫メロイドギンインコグニタへのRNA干渉（RNAI）の適用について説明します。ポリガラクロナーゼ（MI-PG-1）遺伝子。1％レゾルシノールでの4時間のインキュベーションは、線虫の同化トラックを介して二本鎖RNA取り込みを誘発し、MI-CRT転写産物の最大92％の枯渇をもたらしました。サイレンシングのタイムコース分析は、MI-CRTとMi-PG-1の異なる時間パターンを示しました。MI-CRTのサイレンシングは浸漬後20時間後に最適でしたが、Mi-PG-1のサイレンシングは浸漬後44時間後に最適でした。2つの遺伝子の場合、浸漬後68時間後に転写産物の枯渇が検出されなかったため、サイレンシング効果は非常に時間制限されていました。

Plant parasitic nematodes have been, so far, refractory to transformation or mutagenesis. The functional analysis of nematode genes relies on the development of reverse genetic tools adapted to these obligate parasites. Here, we describe the application of RNA interference (RNAi) to the root-knot nematode Meloidogyne incognita for the knock-down of two genes expressed in the subventral esophageal glands of the nematode and potentially involved in parasitism, the calreticulin (Mi-crt) and the polygalacturonase (Mi-pg-1) genes. Incubation in 1% resorcinol for 4 h induced double-stranded RNA uptake through the alimentary track of the nematodes and led to up to 92% depletion of Mi-crt transcripts. Timecourse analysis of the silencing showed different temporal patterns for Mi-crt and Mi-pg-1. The silencing of Mi-crt was optimal 20 h after soaking, whereas the silencing of Mi-pg-1 was optimal 44 h after soaking. For the two genes, the silencing effect was highly time-limited, since no transcript depletion was detectable 68 h after soaking.