DNAアプタマー選択の有利な方法としてのFlumag-Selex

アプタマーは、標的に対して非常に高い親和性を持つSSDNAまたはRNAオリゴヌクレオチドです。それらは、特定の3次元形状のために、選択性と特異性が高いターゲットに結合します。それらは、指数濃縮（SELEX）プロセスによって、いわゆるリガンドの系統的進化によって開発されています。この方法は、DNAの定量化のための蛍光ラベルの2つのステップ使用と、標的固定化のための磁気ビーズの使用で変更しました。したがって、放射性標識は回避されます。磁気ビーズの固定化により、簡単な取り扱い、アプタマーの選択のための非常に少量のターゲットの使用、結合分子と非結合分子の迅速かつ効率的な分離、および厳しい洗浄ステップを使用できます。この修正されたSELEXテクノロジーFlumag-Selexと呼んでいます。Flumag-Selexを使用すると、非常に異なる特性とサイズを持つターゲットのDNAアプタマーを選択できるという目的のための方法論的背景を提供しました。これらのアプタマーは、新しいバイオセンサー受容体として適用されます。この作業では、フラマグセレックスによるストレプトアビジン特異的アプタマーの選択が説明されています。ストレプトアビジン特異的アプタマーを使用して、固定処置後にビオチン化分子を使用してストレプトアビジンでコーティングされた磁気ビーズの表面占有率を確認します。

Aptamers are ssDNA or RNA oligonucleotides with very high affinity for their target. They bind to the target with high selectivity and specificity because of their specific three-dimensional shape. They are developed by the so-called Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment (SELEX) process. We have modified this method in two steps-use of fluorescent labels for DNA quantification and use of magnetic beads for target immobilization. Thus, radioactive labelling is avoided. Immobilization on magnetic beads enables easy handling, use of very small amounts of target for the aptamer selection, rapid and efficient separation of bound and unbound molecules, and stringent washing steps. We have called this modified SELEX technology FluMag-SELEX. With FluMag-SELEX we have provided a methodological background for our objective of being able to select DNA aptamers for targets with very different properties and size. These aptamers will be applied as new biosensor receptors. In this work selection of streptavidin-specific aptamers by FluMag-SELEX is described. The streptavidin-specific aptamers will be used to check the surface occupancy of streptavidin-coated magnetic beads with biotinylated molecules after immobilization procedures.