蛍光寿命イメージング顕微鏡（FLIM）

蛍光寿命イメージング顕微鏡（FLIM）は、顕微鏡画像内のナノ秒励起状態の寿命の空間分布をマッピングする手法です。フリムシステムは、周波数ドメインの両方で実装されており、正弦波強度変調励起光と変調検出器を使用して、およびパルス励起源と時間相関または時間帯の検出を使用して時間領域で実装されています。このレビューでは、周波数ドメインと時間領域のフリム機器の両方が、広場およびポイントスキャン（共焦点）顕微鏡で構築されているさまざまなモードについて説明します。また、フリム装置を構築するための新しい追加戦略について説明します。技術的な実装に加えて、この章では、細胞生物学的および生物医学研究におけるFlimの適用の概要を示します。特に、蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）を使用したin situタンパク質間相互作用研究では、Flimは現代の細胞生物学における堅牢で確立された技術であることが証明されています。イオンイメージング、定量的イメージング、組織の特性評価、医療用途のための生涯コントラストの使用を含む他のアプリケーション領域について説明します。

Fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) is a technique to map the spatial distribution of nanosecond excited state lifetimes within microscopic images. FLIM systems have been implemented both in the frequency domain, using sinusoidally intensity-modulated excitation light and modulated detectors, and in the time domain, using pulsed excitation sources and time-correlated or time-gated detection. In this review we describe the different modes in which both frequency-domain and time-domain FLIM instruments have been constructed in wide-field and in point-scanning (confocal) microscopes. Also, novel additional strategies for constructing FLIM-instruments are discussed. In addition to technical implementation, this chapter gives an overview of the application of FLIM in cell biological en biomedical studies. Especially for in situ protein-protein interaction studies using fluorescence resonance energy transfer (FRET), FLIM has proven to be a robust and established technique in modern cell biology. Other application areas, including usage of lifetime contrast for ion-imaging, quantitative imaging, tissue characterization and medical applications, are discussed.