真核生物のCCAAT結合複合体：酵母、アニデュラ、ヒトの間の分子レベルでの機能的保存にもかかわらず、糸状菌のHAPBサブユニットにおける2番目のNLSの進化aspergillus nidulansの進化

ヘテロミリックCCAAT結合複合体は、真菌、植物、哺乳類を含む真核生物で進化的に保存されています。糸状の真菌Aspergillus nidulansでは、対応する複合体がANCFに指定されました（A.Nidulans CCAAT結合因子）。ANCFは、サブユニットHAPB、HAPC、HAPEで構成されています。DNA結合には、3つのサブユニットすべてが必要です。HAPBには、NLS1とNLS2と呼ばれる2つの推定核局在信号シグナルシーケンス（NLSS）が含まれています。以前は、HAPBの核局在化にはNLS2のみが必要であることが示されていました。さらに、HAPCとHAPEは、ピギーバックメカニズムを介してHAPBとの複合体のみでのみ核に輸送されます。ここでは、さまざまなGFPコンストラクトを使用し、A.nidulanの形質転換のための新しいマーカー遺伝子、すなわちP-アミノベンゾ酸シンターゼをコードするPABAA遺伝子を確立することにより、Saccharomyces cerevisiae（HAP2P）とHumanの両方のHAPB相同タンパク質（HAP2P）とヒト（nf-ya）s.cerevisiaeの核局在のために、HAPB NLS1に相同性を使用します。興味深いことに、a.nidulans hapbの場合、nls1はs.cerevisiaeの核局在に十分でした。A.nidulansでは、HAPB NLS1も異なるタンパク質の状況に存在する場合に機能しました。ただし、A.nidulanでは、s.cerevisiae hap2pとヒトNF-yaの両方が、それぞれのタンパク質にHAPB NLS2が存在した場合にのみ核に入りました。その場合、タンパク質は両方ともAcetamideの成長の欠如に関するA.nidulanのHAP表現型を、少なくとも部分的には、少なくとも部分的には、補完しました。同様に、a.nidulans hapbとヒトNf-yaは、s.cerevisiaeのHap2変異体を補完しました。要約すると、HAPB、HAP2P、およびNF-YAは交換可能です。a.nidulans hapb変異体は、少なくとも部分的には、ヒトNf-yaとs.cerevisiae Hap2pによって補完されたため、この発見は、a.nidulansで見つかった核輸送のピギーバックメカニズムが酵母とヒトで保存されていることを示唆しています。。

The heterotrimeric CCAAT-binding complex is evolutionarily conserved in eukaryotic organisms, including fungi, plants and mammals. In the filamentous fungus Aspergillus nidulans, the corresponding complex was designated AnCF (A.nidulans CCAAT-binding factor). AnCF consists of the subunits HapB, HapC and HapE. All three subunits are necessary for DNA binding. HapB contains two putative nuclear localisation signal sequences (NLSs) designated NLS1 and NLS2. Previously, it was shown that only NLS2 was required for nuclear localisation of HapB. Furthermore, HapC and HapE are transported to the nucleus only in complex with HapB via a piggy back mechanism. Here, by using various GFP constructs and by establishing a novel marker gene for transformation of A.nidulans, i.e. the pabaA gene encoding p-aminobenzoic acid synthase, it was shown that the HapB homologous proteins of both Saccharomyces cerevisiae (Hap2p) and human (NF-YA) use an NLS homologous to HapB NLS1 for nuclear localisation in S.cerevisiae. Interestingly, for A.nidulans HapB, NLS1 was sufficient for nuclear localisation in S.cerevisiae. In A.nidulans, HapB NLS1 was also functional when present in a different protein context. However, in A.nidulans, both S.cerevisiae Hap2p and human NF-YA entered the nucleus only when HapB NLS2 was present in the respective proteins. In that case, both proteins Hap2p and NF-YA complemented, at least in part, the hap phenotype of A.nidulans with respect to lack of growth on acetamide. Similarly, A.nidulans HapB and human NF-YA complemented a hap2 mutant of S.cerevisiae. In summary, HapB, Hap2p and NF-YA are interchangeable. Because the A.nidulans hapB mutant was complemented, at least in part, by both the human NF-YA and S.cerevisiae Hap2p this finding suggests that the piggy-back mechanism of nuclear transport found for A.nidulans is conserved in yeast and human.