代謝の先天性誤差の化学診断のための、プリン、ピリミジン、N-アセチル化アミノ酸、およびジカルボン酸の同時高性能液体クロマトグラフィー分離

目的：いくつかのプリン、ピリミジン、N-アセチル化アミノ酸、および化学診断のためのジカルボン酸の同期のための新しいシンプルで敏感で信頼性の高いイオンペアのHPLC法をセットアップするために、メタボリズムの先天性誤差のスクリーニングのために）。 設計と方法：ペアリング試薬としての2つのバッファーとテトラブチルアンモニウム水酸化物を使用して、ハイパーシルC-18、5マイクロム粒子サイズ、250 x 4.6 mmカラム、およびステップ勾配を使用して分離をセットアップしました。高感度のダイオードアレイUV検出器が200〜300 nmの波長でセットアップされ、260 nmでプリンとピリミジン、および206 nmの他の化合物が明らかになりました。 結果：化合物は、15人の健康な成人の血漿、50人の健康な被験者の尿（1〜3年、4〜6年、8〜10年、12〜18年、25〜35年）、および10人で決定されました。非病理学的羊水サンプル。IEMの化学診断の妥当性を評価するために、カナバン疾患の影響を受けた患者で血漿および尿サンプルを分析しました（n = 10;平均年齢4.6 +/- 2.3）。N-アセチルアスパラギン酸の低血漿レベル（16.96 +/- 19.57マイクロモール/L血漿;健康な成人では検出できません）および劇的に高尿Acetylaspartate濃度（1872.03 +/- 631.86マイクロモール/Mmol Creatinine;年齢が一致したコントロールで観察された）が記録されました。N-アセチルグルタミン酸もN-アセチルアスパルティルグルタミン酸も、カナバン病のコントロールまたは患者の血漿または尿で検出することはできませんでした。 結論：結果は、シトシン、シチジン、クレアチニン、ウラシル、ウリジン、ベータ型 - 型セドウリジン、アデニン、3-メチルアデニン、3-メチルアデニン、ヒポキサンチン、キサンチン、キサンチン、キサンチン、イノシン、イノシン、イノシン、イノシン、イノシンのUV検出による現在のイオン飼料HPLC分離の適合性を示しています。酸、チミン、チミジン、尿酸、1-メチル尿酸、オロチン酸、N-アセチルアスパラギン酸、N-アセチルグルタミン酸、N-アセチルアスパルチルグルタミン酸、マロン酸、メチルマロン酸、GSH、およびGSSSGは、出生前および新生化学診断診断診断の信頼できる方法としての信頼できる方法としてのGSH、GSH、およびGSHSG生物液を使用したIEMのスクリーニング。

OBJECTIVES: To set up a novel simple, sensitive, and reliable ion-pairing HPLC method for the synchronous separation of several purines, pyrimidines, N-acetylated amino acids, and dicarboxylic acids for the chemical diagnosis and screening of inborn errors of metabolism (IEM). DESIGN AND METHODS: The separation was set up using a Hypersil C-18, 5-microm particle size, 250 x 4.6 mm column, and a step gradient using two buffers and tetrabutylammonium hydroxide as the pairing reagent. A highly sensitive diode array UV detector was set up at a wavelength between 200 and 300 nm that revealed purines and pyrimidines at 260 nm and other compounds at 206 nm. RESULTS: Compounds were determined in the plasma of 15 healthy adults, in the urine of 50 healthy subjects (1-3 years, 4-6 years, 8-10 years, 12-18 years, 25-35 years), and in 10 non-pathological amniotic fluid samples. To assess the validity of the chemical diagnosis of IEM, plasma and urine samples were analyzed in patients affected by Canavan disease (n = 10; mean age 4.6 +/- 2.3). Low plasma levels of N-acetylaspartate (16.96 +/- 19.57 micromol/L plasma; not detectable in healthy adults) and dramatically high urinary N-acetylaspartate concentrations (1872.03 +/- 631.86 micromol/mmol creatinine; 450 times higher than that which was observed in age-matched controls) were recorded. Neither N-acetylglutamate nor N-acetylaspartylglutamate could be detected in the plasma or urine of controls or patients with Canavan disease. CONCLUSIONS: The results demonstrate the suitability of the present ion-pairing HPLC separation with UV detection of cytosine, cytidine, creatinine, uracil, uridine, beta-pseudouridine, adenine, 3-methyladenine, hypoxanthine, xanthine, xanthosine, inosine, guanosine, ascorbic acid, thymine, thymidine, uric acid, 1-methyluric acid, orotic acid, N-acetylaspartate, N-acetylglutamate, N-acetylaspartylglutamate, malonic acid, methylmalonic acid, GSH, and GSSG as a reliable method for the prenatal and neonatal chemical diagnosis and screening of IEM using biological fluids.