新生児ラット心筋細胞におけるノルアドレナリンによる慢性刺激後のベータ3-アドレナリン受容体機能発現の誘導

この研究は、ノルアドレナリン（NOR）特性を使用して、ラット新生児心筋細胞のベータ（3）アドレナリン受容体（ARS）を特徴付けて、3つのベータARの発現と機能を調節することを目的としています。NOR（生理学的非選択的アゴニスト）、イソプレナリン（ISO、ベータ非選択的アゴニスト）、ドブタミン（DOB、ベータ（1）選択的アゴニスト）、およびプロカテロール（Proc、ベータ（2）選択的アゴニスト）の効果を評価しました。心筋細胞を使用した蓄積未処理または100 microMまたは24時間の治療。フォルスコリン刺激cAMPの蓄積の阻害は、NOR、イソプレナリン、およびベータ（3）選択的アゴニスト4- [2- [（2-（3-クロロフェニル）-2-ヒドロキシエチル）アミノ]プロピルを使用して決定されました。BRL 37344）および5- [ - 2-（[ - 2-（3-クロロフェニル）-2-ヒドロキシエチル]アミノ）プロピル] -1,3-ベンゾジオキソール-2,2-ジカルボン酸（CL 316243）。実験は、プロプラノロールまたは2-ヒドロキシ-5- [2- [[2-ヒドロキシ-3-]の非存在下または存在下で実施されました。]フェノキシ]プロピル]アミノ]エトキシ] - ベンズアミドメタンスルホン酸（CGP 20712a）および/または1- [2,3-（dihydro-7-メチル-1H-インデン-4-イル）oxy] -3- [（1-メチルエチル）アミノ] -2-ブタノール塩酸塩（ICI 118551）ベータ（1）およびベータ（2）-AR刺激および1-（2-エチルフェノキシ）-3- [[1S）-1,2,3、4-テトラヒドロ-1-ナフタレニル]アミノ - （2S）-2-プロパノール塩酸塩（SR 59230A）（ベータ（3）選択拮抗薬）。さらに、3つのサブタイプのレベルは、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応とウエスタンブロッティングによって決定されました。NOR、イソプレナリン、およびDOBによって誘発されるcAMPの活性化も前処理も減少しませんでしたが、PROC応答は廃止されました。CGP 20712AまたはICI 118551によるNOR応答の阻害は、ベータ（1）およびベータ（2）-ARがダウンレギュレートされ、慢性刺激にさらされた心筋細胞でもベータ（2）-AR機能活性が廃止されたことを示しました。ベータ（3）-AR関数は、ベータ（1） - /ベータ（2）-ARがブロックされ、ノー処理された細胞のみのベータ（3）選択的アゴニストのみがブロックされた場合、NORおよびISOで観察されました。この反応は、SR 59230Aによって完全に阻害され、G（I）タンパク質が関与しました。さらに、機能研究の結果は、発現実験の結果とよく一致しています。結論として、これらのデータは、ベータ（3）-ARが機能的にアップレギュレートされ、ベータ（1） - およびベータ（2）-ARへの慢性暴露後のラット新生児心筋細胞のg（i）タンパク質に結合されるという強力な証拠を提供します。ダウンレギュレートされています。

This study aimed to characterize beta(3)-adrenergic receptors (ARs) in rat neonatal cardiomyocytes using the noradrenaline (NOR) properties to modulate the expression and function of the three beta-ARs. We assessed the effect of NOR (physiological nonselective agonist), isoprenaline (ISO, beta-nonselective agonist), dobutamine (DOB, beta(1)-selective agonist), and procaterol (PROC, beta(2)-selective agonist) on cAMP accumulation using cardiomyocytes untreated or treated with 100 microM NOR for 24 h. The inhibition of forskolin-stimulated cAMP accumulation was determined using NOR, isoprenaline, and the beta(3)-selective agonists 4-[2-[(2-(3-chlorophenyl)-2-hydroxyethyl)amino]propyl]phenoxyacetic acid (BRL 37344) and 5-[-2-([-2-(3-chlorophenyl)-2-hydroxyethyl]amino)propyl]-1,3-benzodioxole-2,2-dicarboxylate (CL 316243). The experiments were performed in the absence or presence of propranolol or 2-hydroxy-5-[2-[[2-hydroxy-3-[4-[1-methyl-4-(trifluoromethyl)-1H-imidazol-2-yl]phenoxy]propyl]amino]ethoxy]-benzamide methanesulfonate (CGP 20712A) and/or 1-[2,3-(dihydro-7-methyl-1H-inden-4-yl)oxy]-3-[(1-methylethyl)amino]-2-butanol hydrochloride (ICI 118551) to inhibit beta(1)- and beta(2)-AR stimulation and 1-(2-ethylphenoxy)-3-[[1S)-1,2,3,4-tetrahydro-1-naphthalenyl]amino-(2S)-2-propanol hydrochloride (SR 59230A) (beta(3)-selective antagonist). In addition, the level of the three subtypes was determined by reverse transcription polymerase chain reaction and Western blotting. NOR pretreatment decreased the activation of cAMP induced by NOR, isoprenaline, and DOB, whereas PROC response was abolished. The inhibition of NOR response by CGP 20712A or ICI 118551 demonstrated that beta(1)- and beta(2)-ARs are down-regulated and that beta(2)-AR functional activity was also abolished in cardiomyocytes exposed to chronic stimulation. beta(3)-AR function was observed with NOR and ISO when beta(1)-/beta(2)-ARs were blocked and with both beta(3)-selective agonists in NOR-treated cells only. This response was completely inhibited by SR 59230A and involved G(i) protein. Furthermore, the results from functional studies agree well with those from expression experiments. In conclusion, these data provide strong evidence that beta(3)-ARs are functionally up-regulated and coupled to G(i) protein in rat neonatal cardiomyocytes following chronic exposure to NOR when beta(1)- and beta(2)-ARs are down-regulated.