ジフテリア毒素断片のCreを介した発現によるin vivo遺伝的アブレーション

ES細胞での相同再結合により、EGFP-DTA（強化された緑色蛍光タンパク質 - ジフテリア毒素フラグメントA）カセットをROSA26遺伝子座に導入することにより、ROSA26-EGFP-DTAマウスラインを生成しました。このマウスはeGFPを遍在して発現しますが、DTA発現はEGFP、NEOカセット、強力な転写停止シーケンスの存在によって防止されます。この構造を運ぶマウスは正常で肥沃で、DTA発現がないことを示しています。ただし、フロックス領域のCREを介した切除により、DTA発現が活性化され、CRE発現細胞の特定のアブレーションが生じます。このアプローチの例として、NKX2.5-CREおよびWNT1-CREマウス系統をそれぞれ使用して、NKX2.5およびWNT1発現細胞を除去しました。NKX2.5とWNT1が発現する正確な組織の喪失を観察しました。一般的なGFPレポーターであることとは別に、ROSA26-GFP-DTAマウス系統は、細胞の特定のグループの遺伝的アブレーションに有用なリソースを提供する必要があります。

We generated a ROSA26-eGFP-DTA mouse line by introducing an eGFP-DTA (enhanced green fluorescent protein -- diphtheria toxin fragment A) cassette into the ROSA26 locus by homologous recombination in ES cells. This mouse expresses eGFP ubiquitously, but DTA expression is prevented by the presence of eGFP, a Neo cassette, and a strong transcriptional stop sequence. Mice carrying this construct are normal and fertile, indicating the absence of DTA expression. However, upon Cre-mediated excision of the floxed region DTA expression is activated, resulting in the specific ablation of Cre-expressing cells. As an example of this approach, we ablated Nkx2.5 and Wnt1-expressing cells by using the Nkx2.5-Cre and Wnt1-Cre mouse lines, respectively. We observed loss of the precise tissues in which Nkx2.5 and Wnt1 are expressed. Apart from being a general GFP reporter, the ROSA26-GFP-DTA mouse line should provide a useful resource for genetic ablation of specific groups of cells.