ヒト脂肪由来細胞の免疫表現型：間質関連および幹細胞関連マーカーの時間的変化

脂肪組織は、多能性成人幹細胞の豊富でアクセス可能な供給源を表し、多くの研究者が組織工学用途に使用しています。ただし、すべての研究所が隔離と通過の同等の段階で細胞を使用するわけではありません。連続した脂肪由来幹細胞（ASCS）と比較して、新しく分離されたヒト脂肪組織由来間質血管画分（SVF）細胞の免疫表現型を比較しました。初期SVF細胞には、1：32の頻度でコロニー形成ユニット線維芽細胞が含まれていました。コロニー形成ユニットの脂肪細胞と骨芽細胞は、SVF細胞に同等の周波数（それぞれ1:28と1:16）に存在していました。フローサイトメトリーに基づく脂肪由来細胞の免疫表現型は、順守と通過により徐々に変化しました。間質細胞関連マーカー（CD13、CD29、CD44、CD63、CD73、CD90、CD166）は、最初はSVF細胞で低く、連続した通路とともに大幅に増加しました。幹細胞関連マーカーCD34は、SVF細胞および/または初期パセージASCでピークレベルであり、培養期間を通してレベルが低下していますが、存在し続けていました。アルデヒドデヒドロゲナーゼと多剤耐性輸送タンパク質（ABCG2）は、どちらも造血幹細胞を特定および特性化するために使用され、検出可能なレベルでSVF細胞とASCによって発現されます。内皮細胞関連マーカー（CD31、CD144またはVE-カドヘリン、血管内皮成長因子受容体2、フォンウィルブランド因子）をSVF細胞で発現し、連続通過とともに有意に変化しませんでした。したがって、胎児のウシ血清補充培地におけるヒト脂肪由来細胞のプラスチックおよびその後の拡張は、rude SVFの不均一性と比較して、間質免疫表現型を発現する細胞を濃縮する比較的均一な細胞集団のために選択されます。

Adipose tissue represents an abundant and accessible source of multipotent adult stem cells and is used by many investigators for tissue engineering applications; however, not all laboratories use cells at equivalent stages of isolation and passage. We have compared the immunophenotype of freshly isolated human adipose tissue-derived stromal vascular fraction (SVF) cells relative to serial-passaged adipose-derived stem cells (ASCs). The initial SVF cells contained colony-forming unit fibroblasts at a frequency of 1:32. Colony-forming unit adipocytes and osteoblasts were present in the SVF cells at comparable frequencies (1:28 and 1:16, respectively). The immunophenotype of the adipose-derived cells based on flow cytometry changed progressively with adherence and passage. Stromal cell-associated markers (CD13, CD29, CD44, CD63, CD73, CD90, CD166) were initially low on SVF cells and increased significantly with successive passages. The stem cell-associated marker CD34 was at peak levels in the SVF cells and/or early-passage ASCs and remained present, although at reduced levels, throughout the culture period. Aldehyde dehydrogenase and the multidrug-resistance transport protein (ABCG2), both of which have been used to identify and characterize hematopoietic stem cells, are expressed by SVF cells and ASCs at detectable levels. Endothelial cell-associated markers (CD31, CD144 or VE-cadherin, vascular endothelial growth factor receptor 2, von Willebrand factor) were expressed on SVF cells and did not change significantly with serial passage. Thus, the adherence to plastic and subsequent expansion of human adipose-derived cells in fetal bovine serum-supplemented medium selects for a relatively homogeneous cell population, enriching for cells expressing a stromal immunophenotype, compared with the heterogeneity of the crude SVF.