熱誘導性デグロンと条件付き変異体の作成

条件付き変異体は、許容と呼ばれる1つの条件の下で特定の遺伝子の機能を保持し、非容疑と呼ばれる異なる条件の下でその機能を欠いています。後者は、遺伝子の野生型対立遺伝子にとってまだ許容されなければなりません。このような変異体は、遺伝子または遺伝子産物の制御された不活性化に続く生理学的変化の分析を可能にし、任意の遺伝子の機能に対処するために使用できます。半世紀以上前に機能研究で最初に使用された温度感受性（TS）変異体は、遺伝分析の主力であり続けています。古典的なTSアプローチの制限の1つは、特定の遺伝子を変異させてTS産物を生成できるかどうかに関する不確実性です。従来のTS変異のもう1つの問題は、それらが漏れが多すぎて役に立たないことが多いことです。1994年に、酵母Saccharomyces cerevisiaeのNエンドルール経路を標的とする熱活性化分解信号（Degron）に基づく新しい方法について説明しました。対応する変異体は、それらを従来のTS変異体と区別するためにTD（温度活性化デグロン）と呼ばれました。TDメソッドは、目的の遺伝子のミスセンス変異も、その発現パターンの変化も必要としません。ジヒドロ葉酸還元酵素を含むn末端ARG残基（n末端ルールの不安定な残基）のTSバリアントであるArg-DHFR（TS）は、そのarg-dhfr（TS）は23度で長寿命でしたが、以前は不可解なデグロンの活性化により、37度で短命になりました。線形融合でリンクするこの携帯性TS-degronは、目的のタンパク質に37度で後者を破壊し、それによって対応する遺伝子のTS（TD）変異体を生成します。1994年のTDメソッドの導入以来、多数の研究が機能分析で特定の遺伝子のTD対立遺伝子を使用しています。

Conditional mutants retain the function of a specific gene under one set of conditions, called permissive, and lack that function under a different set of conditions, called nonpermissive; the latter must be still permissive for the wild-type allele of a gene. Such mutants make possible the analysis of physiological changes that follow controlled inactivation of a gene or gene product and can be used to address the function of any gene. Temperature-sensitive (ts) mutants, first used in functional studies more than half a century ago, remain a mainstay of genetic analyses. One limitation of the classical ts approach is the uncertainty as to whether a given gene can be mutated to yield a ts product. Another problem with conventional ts mutations is that they are often too leaky to be useful. In 1994, we described a new method, based on a heat-activated degradation signal (degron) that is targeted by the N-end-rule pathway in the yeast Saccharomyces cerevisiae. The corresponding mutants were termed td (temperature-activated degron) to distinguish them from conventional ts mutants. The td method requires neither a missense mutation in a gene of interest nor an alteration in its expression patterns. Arg-DHFR(ts), a ts variant of dihydrofolate reductase-bearing N-terminal Arg residue (a destabilizing residue in the N-end rule) was shown to function as a portable, heat-activated degron, in that Arg-DHFR(ts) was long-lived at 23 degrees but became short-lived at 37 degrees , owing to activation of its previously cryptic degron. Linking, in a linear fusion, this portable ts-degron to a protein of interest results in destruction of the latter at 37 degrees , thereby yielding a ts (td) mutant of a corresponding gene. Since the introduction of the td method in 1994, numerous studies have successfully used td alleles of specific genes in functional analyses.