ヒトリンパ芽球インターフェロンアルファの複数の成分の精製と特性評価

Sendai Virus誘発性ナマルワ細胞に由来するヒトインターフェロンα（IFN-α）の22成分は、4つのモノクローナル抗体親和性カラムを使用した連続免疫吸着剤アフィニティークロマトグラフィーによって精製されました。特定の活性は、マディンダービーウシ腎細胞の0.2から2.6 x 10（8）Iu/mgタンパク質、ヒトウィッシュ細胞の0.3〜4.6 x 10（8）Iu/mgタンパク質、および10（4）から7 xの範囲でした10（5）マウスL929細胞の単位/mgタンパク質。成分の見かけの分子量は、非還元ドデシルポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用して17,500〜23,300の範囲であり、還元ドデシルポリアクリルアミドゲル電気泳動を還元する還元ナトリウムドデシルポリアクリルアミドゲル電気ホアシスを使用して17,500〜27,600の範囲でした。アミノ末端アミノ酸配列は、クローン化されたヒトIFN-α遺伝子について報告されたものと同様に、成分間で類似していた（Pestka、S。（1986）Methods Enzymol。119、3-14）。ただし、4つのコンポーネント、F、I、L、およびMには、cDNAクローンから予測されたものと比較すると一意に見えるアミノ末端アミノ酸配列があります。1つの成分、Pre-Aには、残基2〜4のASN-LEU-SERのASNに潜在的なN結合グリコシル化部位があります。

Twenty-two components of human interferon-alpha (IFN-alpha) derived from Sendai virus-induced Namalwa cells were purified by sequential immunoadsorbent affinity chromatography using four monoclonal antibody affinity columns followed by ultrafiltration and reversed-phase high-performance liquid chromatography. The specific activity ranged from 0.2 to 2.6 x 10(8) IU/mg protein on Madin-Darby bovine kidney cells, 0.3 to 4.6 x 10(8) IU/mg protein on human WISH cells, and 10(4) to 7 x 10(5) units/mg protein on mouse L929 cells. The apparent molecular weights of the components ranged from 17,500 to 23,300 using nonreducing sodium dodecyl polyacrylamide-gel electrophoresis and 17,500 to 27,600 using reducing sodium dodecyl polyacrylamide-gel electrophoresis. The amino-terminal amino acid sequences were similar among the components as well as to those reported for the cloned human IFN-alpha genes (Pestka, S. (1986) Methods Enzymol. 119, 3-14). However, four components, f, i, l, and m, have amino-terminal amino acid sequences which appear to be unique when compared to those predicted from the cDNA clones. One component, pre-a, has a potential N-linked glycosylation site on the Asn of residues 2 through 4, Asn-Leu-Ser.