Hoechst 33342を使用した海洋細菌のフローサイトメトリー分析

4 '、6-ジアミジーノ-2-フェニルインドール（DAPI）およびHoechst 33342（HO342、ビスベンツアミド誘導体）を使用した細菌豊富さのフローサイトメトリー（FCM）推定の精度と精度を調査しました。ハワイのオアフ島近く。FCM推定値の精度は、過蛍光顕微鏡を使用して直接カウントに対して評価されました。DAPIとHO342は、FCM分析のための海洋従属性細菌を染色するのに適したHO342をより適した化学の2つの側面が異なります。これらの違いは、光合成プロクロロコッカスsppの集団から従属栄養素集団を明確に分離するためにデュアルビームFCM分析を必要とするオープンオーシャン生態系の研究で最も重要です。細菌集団は、HO342がより高い相対蛍光量子収量を持っているため、DAPIで染色された場合よりもHO342で染色された場合、バックグラウンド蛍光と区別するのが容易でした。DAPI染色集団については、おそらく二本鎖RNAを含むDAPIによって形成された蛍光錯体によるものである青色蛍光の大幅に高い係数の変動係数が観察されました。FCMは、HO342およびDAPI染色されたサンプルの対応する上蛍光顕微鏡検査の直接カウントよりも平均2.0および12％高い推定値を推定します。FCM推定値と直接カウントの間のペアサンプルT検定では、HO342染色サンプルに有意差はなく、DAPI染色サンプルで有意差が見つかりました。複製FCM存在量推定の変動係数は、6 x 10〜15 x 10セルmlの天然細菌濃度で0.63から2.9％（平均、1.5％）の範囲でした。

We investigated the accuracy and precision of flow cytometric (FCM) estimates of bacterial abundances using 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and Hoechst 33342 (HO342, a bisbenzamide derivative) on paraformaldehyde-fixed seawater samples collected from two stations near Oahu, Hawaii. The accuracy of FCM estimates was assessed against direct counts by using epifluorescence microscopy. DAPI and HO342 differ in two aspects of their chemistry that make HO342 better suited for staining marine heterotrophic bacteria for FCM analysis. These differences are most important in studies of open-ocean ecosystems that require dual-beam FCM analysis to clearly separate heterotrophic bacterial populations from populations of photosynthetic Prochlorococcus spp. Bacterial populations were easier to distinguish from background fluorescence when stained with HO342 than when stained with DAPI, because HO342 has a higher relative fluorescence quantum yield. A substantially higher coefficient of variation of blue fluorescence, which was probably due to fluorescent complexes formed by DAPI with double-stranded RNA, was observed for DAPI-stained populations. FCM estimates averaged 2.0 and 12% higher than corresponding epifluorescence microscopy direct counts for HO342 and DAPI-stained samples, respectively. A paired-sample t test between FCM estimates and direct counts found no significant difference for HO342-stained samples but a significant difference for DAPI-stained samples. Coefficients of variation of replicate FCM abundance estimates ranged from 0.63 to 2.9% (average, 1.5%) for natural bacterial concentrations of 6 x 10 to 15 x 10 cells ml.