SIRT1触媒活性の阻害はp53アセチル化を増加させますが、DNA損傷後の細胞生存を変化させません

ヒトSIRT1は、p53腫瘍抑制タンパク質を脱アセチル化する酵素であり、DNA損傷誘発細胞死を含むp53依存性機能を調節することが示唆されています。このレポートでは、SIRT1触媒活性の新規、強力な、特異的小分子阻害剤であるEX-527を使用して、DNA損傷後のp53アセチル化と細胞生存におけるSIRT1の役割を調べました。EX-527による治療は、原発性ヒト乳腺上皮細胞およびいくつかの細胞株における異なるタイプのDNA損傷の後、P53のリジン382でのアセチル化を劇的に増加させました。重要なことに、EX-527によるSIRT1触媒活性の阻害は、エトポシドで処理した細胞における細胞の成長、生存率、またはp53対照遺伝子発現に影響を与えませんでした。アセチル-P53は、ヒストン脱アセチラーゼ（HDAC）クラスI/II阻害剤トリコスタチンA（TSA）によっても増加しました。EX-527とTSAは、Acetyl-P53レベルを増加させるために相乗的に作用し、P53アセチル化がSIRT1とHDACの両方によって調節されていることを確認しました。TSAのみがDNA損傷後の細胞生存率を低下させましたが、EX-527とTSAの組み合わせは、細胞の生存率と成長にそれ以上の影響はありませんでした。これらの結果は、SIRT1はp53を脱アセチル化しますが、これは特定の細胞株および原発性ヒト乳腺上皮細胞のDNA損傷に続く細胞生存に役割を果たさないことを示しています。

Human SIRT1 is an enzyme that deacetylates the p53 tumor suppressor protein and has been suggested to modulate p53-dependent functions including DNA damage-induced cell death. In this report, we used EX-527, a novel, potent, and specific small-molecule inhibitor of SIRT1 catalytic activity to examine the role of SIRT1 in p53 acetylation and cell survival after DNA damage. Treatment with EX-527 dramatically increased acetylation at lysine 382 of p53 after different types of DNA damage in primary human mammary epithelial cells and several cell lines. Significantly, inhibition of SIRT1 catalytic activity by EX-527 had no effect on cell growth, viability, or p53-controlled gene expression in cells treated with etoposide. Acetyl-p53 was also increased by the histone deacetylase (HDAC) class I/II inhibitor trichostatin A (TSA). EX-527 and TSA acted synergistically to increase acetyl-p53 levels, confirming that p53 acetylation is regulated by both SIRT1 and HDACs. While TSA alone reduced cell survival after DNA damage, the combination of EX-527 and TSA had no further effect on cell viability and growth. These results show that, although SIRT1 deacetylates p53, this does not play a role in cell survival following DNA damage in certain cell lines and primary human mammary epithelial cells.