血小板濃縮物のフローサイトメトリーベースの滅菌試験の基本

背景：フローサイトメトリー（FACS）は、血液銀行の一般的な手法です。たとえば、血漿および細胞血液産物に残留白血球の列挙に使用されます。バフィーコート由来の血小板濃縮物（PC）の不妊検査にも適用できるかどうかが調査されました。 研究の設計と方法：血漿還元PCに細菌を吐き出し、さまざまな時間に20〜24または37度Cで保存しました。次の10種が使用されました：cereus、enterobacter cloacae、Escherichia coli、Klebsiella pneumoniae、Propionibacterium ecnes、Pseudomonas aeruginosa、aureus、Staphylococcus epidermidis、serratia marcescens and yersicens and yersynia and Yererscens and yerscens and yerscens coccus aureus、細菌DNAをチアゾールオレンジで染色しました。血小板を溶解した後、細菌はFACSによって列挙されました。 結果：使用されるすべての細菌種は、FACSで検出可能でした。低い検出限界は、マイクロールあたり約100個の細菌、つまり1 mLあたり10（5）でした。一般に、測定された力価は、コロニー形成アッセイによって決定されるものよりも1.2〜3倍高かった。バクテリア雲のドットプロットが細菌の破片のドットプロットと重なり合った場合（肺炎K.肺炎K.肺炎）、それらは一貫して低かった。PCサンプルに細菌1 mlあたり約1コロニー形成単位を接種し、37度Cに保管すると、ほとんどの種は21時間以内に検出されました。例外はE. cloacaeとP. acnesで、それぞれ24〜40時間と64時間後に検出されました。20〜24度Cでは、検出時間は強く延長されました。 結論：FACSによるPCの不妊検査は、実行可能なアプローチです。現在のデータは、テスト前に37度CでPCサンプルを20〜24時間インキュベートすることを示唆しています。ゆっくりと成長する細菌の場合、インキュベーション期間は1〜2日間延長する必要があります。

BACKGROUND: Flow cytometry (FACS) is a common technique in blood banking. It is used, for example, for the enumeration of residual white blood cells in plasma and in cellular blood products. It was investigated whether it can also be applied for sterility testing of buffy coat-derived platelet concentrates (PCs). STUDY DESIGN AND METHODS: Plasma-reduced PCs were spiked with bacteria and stored at 20 to 24 or 37 degrees C for various times. The following 10 species were used: Bacillus cereus, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Propionibacterium acnes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Serratia marcescens, and Yersinia enterocolitica. Bacterial DNA was stained with thiazole orange. After the platelets were lysed, bacteria were enumerated by FACS. RESULTS: All bacteria species used were detectable by FACS. The lower detection limit was approximately 100 bacteria per microL, that is, 10(5) per mL. In general, the titers measured were 1.2- to 3-fold higher than those determined by colony forming assay. In one case (K. pneumoniae) in which the dot plot of the bacteria cloud overlapped with that of bacteria debris, they were consistently lower. When PC samples were inoculated with approximately 1 colony-forming unit per mL of bacteria and kept at 37 degrees C, most species were detected within 21 hours or less. Exceptions were E. cloacae and P. acnes, which were detected after 24 to 40 and 64 hours, respectively. At 20 to 24 degrees C, the detection times were strongly prolonged. CONCLUSION: Sterility testing of PCs by FACS is a feasible approach. The present data suggest incubating PC samples for 20 to 24 hours at 37 degrees C before testing. For slow-growing bacteria, the incubation period must be prolonged by 1 to 2 days.