カンナビノイドCB2受容体：ラット脳における免疫組織化学的局在

CB2カンナビノイド受容体の脳発現は、脳CB1受容体の発現と比較して、はるかに十分に確立されておらず、特徴付けられています。CB2受容体は末梢および免疫組織で激しく発現しているため、脳ミクログリアでの発現が予想されています。それにもかかわらず、私たちは今、この受容体のより広いCNSの役割をサポートする神経パターンの脳におけるCb2受容体様免疫反応性の発現について説明します。2つの抗CB2親和性精製ポリクローナル抗体を、アミノ酸1-33および20-33に対応するペプチドコンジュゲートを免疫したウサギで育てました。ウエスタンブロット分析により、これらの血清を使用して特定された特定のバンドが明らかになり、血清が8.3マグ/mlの免疫ペプチドで前吸収されたときに存在しませんでした。これらの研究、および脳CB1およびCB2 mRNAの初期RT-PCR分析は、CB1受容体のレベルよりもはるかに低いレベルでの脳CB2受容体転写産物の発現もサポートしています。CB2カンナビノイド受容体mRNAは、野生型の小脳ではっきりと発現しましたが、CB2ノックアウトマウスでは明確に発現していませんでした。CB2免疫染色は、マウスC末端CB2受容体抗体を使用して、CB2ノックアウトマウスでは野生型の脊椎5番目の核の胞子部分で検出されました。免疫組織化学分析により、多くのラット脳領域における見かけのニューロンおよびグリアプロセスにおけるCB2受容体の豊富な免疫染色が明らかになりました。小脳purkinje細胞および海馬錐体細胞は、事前吸着血清で切片を染色したときに存在しない実質的な免疫反応性を明らかにしました。内側前庭核。ビトロ、CB2免疫反応性は、海馬細胞培養にも存在していました。多くの脳領域におけるグリアおよびニューロンパターンにおけるCB2免疫反応性の多焦点発現は、CB2受容体が脳で果たす可能性のある役割の再評価を示唆しています。

Brain expression of CB2 cannabinoid receptors has been much less well established and characterized in comparison to the expression of brain CB1 receptors. Since CB2 receptors are intensely expressed in peripheral and immune tissues, expression in brain microglia has been anticipated. Nevertheless, we now describe expression of CB2-receptor-like immunoreactivity in brain in neuronal patterns that support broader CNS roles for this receptor. Two anti-CB2 affinity purified polyclonal antibodies were raised in rabbits immunized with peptide conjugates that corresponded to amino acids 1-33 and 20-33. Western blot analyses revealed specific bands that were identified using these sera and were absent when the sera were preadsorbed with 8.3 mug/ml of the immunizing peptides. These studies, and initial RT-PCR analyses of brain CB1 and CB2 mRNAs, also support the expression of brain CB2 receptor transcripts at levels much lower than those of CB1 receptors. CB2 cannabinoid receptor mRNA was clearly expressed in the cerebellum of wild type but not in CB2 knockout mice. CB2 immunostaining was detected in the interpolar part of spinal 5th nucleus of wild type but not in CB2 knockout mice, using a mouse C-terminal CB2 receptor antibody. Immunohistochemical analyses revealed abundant immunostaining for CB2 receptors in apparent neuronal and glial processes in a number of rat brain areas. Cerebellar Purkinje cells and hippocampal pyramidal cells revealed substantial immunoreactivity that was absent when sections were stained with preadsorbed sera. CB2 immunoreactivity was also observed in olfactory tubercle, islands of Calleja, cerebral cortex, striatum, thalamic nuclei, hippocampus, amygdala, substantia nigra, periaqueductal gray, paratrochlear nucleus, paralemniscal nucleus, red nucleus, pontine nuclei, inferior colliculus and the parvocellular portion of the medial vestibular nucleus. In-vitro, CB2 immunoreactivity was also present in hippocampal cell cultures. The multifocal expression of CB2 immunoreactivity in glial and neuronal patterns in a number of brain regions suggests reevaluation of the possible roles that CB2 receptors may play in the brain.