ヒト精巣皮質細胞の分離と栽培：ヒト精巣および男性の不妊症における線維性プロセスの調査のための新しいモデル

コンテキスト：不妊の男性の精巣における線維性のリモデリング、特に尿細管壁は一般的ですが、これらの顕著な変化の理由や結果は知られていません。細胞培養とex vivo研究に基づいて、我々は以前、その産物トリプターゼとヒスタミンを介したマスト細胞が線維症の発生に関与していることを示唆しました。しかし、関連するヒト精巣モデルの研究は、この仮説と精巣線維症のメカニズムをさらにテストするために必要です。 目的：この研究の目的は、成人のヒト精巣皮質細胞の分離、培養、特性評価でした。 患者と介入：周囲細胞は、閉塞性のアゾス植物（n = 8）および下酢酸療法（n = 2）に苦しむ男性の生検から得られましたが、正常な精子形成を示しました。 結果：外植片培養は、すべての生検から得られました。培養細胞の免疫染色および対応するパラフィン包埋組織は、線維芽細胞（CD90/THY-1）および平滑筋細胞（アルファスムザの筋肉アクチン）のマーカーに対する抗体を伴う抗体を患っていることを明確に証明しました。これらの細胞は筋線維芽細胞の形態学的特徴を示し、遺伝子アレイ分析と免疫組織化学は、細胞外マトリックス遺伝子の主要な発現と基底膜成分をコードする遺伝子の主要な発現を明らかにしました。培養細胞は、主要なマスト細胞産物ヒスタミンとトリプターゼの受容体を保持します。ヒスタミン（100ミクロム）とトリプターゼアゴニストペプチドSLIGKV（10ミクロム）を添加すると、細胞内カルシウムレベルが一時的に増加し、受容体の機能が確認されました。 結論：ヒト周囲細胞は、開始されたマスト細胞、ヒト精巣の相互作用を含むパラクリンの調査のための新しいモデルであり、男性の特発性不妊の根底にある線維性プロセスの研究を可能にすると結論付けています。

CONTEXT: Fibrotic remodeling, especially of the tubule wall, in testes of infertile men is common, but reasons or consequences of these striking changes are not known. Based on cell culture and ex vivo studies, we previously suggested that mast cells via their products tryptase and histamine are involved in the development of fibrosis. However, studies in a relevant human testicular model are required to further test this hypothesis and the mechanisms of testicular fibrosis in general. OBJECTIVE: The objective of the study was the isolation, culture, and characterization of adult human testicular peritubular cells. PATIENTS AND INTERVENTIONS: Peritubular cells were obtained from biopsies of men suffering from obstructive azoospermia (n = 8) and varicocele (n = 2) but displaying normal spermatogenesis. RESULTS: Explant cultures were obtained from all biopsies. Immunostaining of the cultured cells and corresponding paraffin-embedded tissues with antibodies against markers of fibroblasts (CD90/Thy-1) and smooth muscle cells (alpha-smooth muscle actin) clearly proved their origin from the peritubular region. These cells displayed morphological features of myofibroblasts, and gene array analyses as well as immunohistochemistry revealed the predominant expression of extracellular matrix genes and genes coding for basement membrane components. The cultured cells retain receptors for the major mast cell products histamine and tryptase. The addition of histamine (100 microm) and the tryptase agonist peptide SLIGKV (10 microm) resulted in a transient increase in intracellular calcium levels, confirming the functionality of the receptors. CONCLUSIONS: We conclude that human peritubular cells are a novel model for the investigation of paracrine, including mast cell initiated, interactions in the human testis, which will allow the study of fibrotic processes underlying male idiopathic infertility.