細胞内摂取されたDSRNAは、HCV RNAをサイレンシングするための有効性を高め、ウイルス遺伝子型の変動を克服しました

RNA干渉（RNAi）を使用して哺乳類細胞のウイルス複製を阻害するため、強力な新しい抗ウイルス療法になる可能性があります。小さな干渉RNA（siRNA）はRNAIに効果的かもしれませんが、たとえば、効果的なsiRNA標的部位を予測し、ウイルス集団の不均一な配列を標的とするなど、それぞれの場合に解決する必要がある技術的な問題がいくつかあります。ここでは、長い二本鎖RNA（dsRNA）から生成された綿密なsiRNAが、C型肝炎ウイルス（HCV）レプリコンを抱えるHUH-7細胞にRNAiを誘導し、HCV遺伝子型の変動を克服できることをここで示しています。しかし、哺乳類細胞では、長いdsRNAがインターフェロン反応を誘発し、細胞死を引き起こしました。ここでは、この方法の改善、U6プロモーター駆動型の長いヘアピンRNAの発現を、鎖鎖に複数の点変異を伴う発現について説明します。これにより、通常、DSRNAによって引き起こされるインターフェロン応答または細胞死を引き起こすことなく、HCV RNA複製とHCVタンパク質発現を効率的に沈黙させることができます。結論として、細胞内で摂取されたDSRNAはRNAIを効率的に誘導し、HCVの突然変異率が高いにもかかわらず、HCV RNAをサイレンシングするための実現可能な治療戦略であるべきです。

RNA interference (RNAi) can be used to inhibit viral replication in mammalian cells and therefore could be a powerful new antiviral therapy. Small interfering RNA (siRNA) may be effective for RNAi, but there are some technical problems that must be solved in each case, for example, predicting the effective siRNA target site and targeting heterogeneous sequences in a virus population. We show here that diced siRNA generated from long double-stranded RNA (dsRNA) is highly effective for inducing RNAi in HuH-7 cells harboring hepatitis C virus (HCV) replicons and can overcome variations in the HCV genotype. However, in mammalian cells, long dsRNA induced an interferon response and caused cell death. Here we describe an improvement of this method, U6 promoter-driven expression of long hairpin-RNA with multiple point mutations in the sense strand. This can efficiently silence HCV RNA replication and HCV protein expression without triggering the interferon response or cell death normally caused by dsRNA. In conclusion, intracellular-diced dsRNA efficiently induces RNAi, and, despite the high rate of mutation in HCV, it should be a feasible therapeutic strategy for silencing HCV RNA.