AryldithioEthyloxycarbonyl（Ardec）：軽度の還元条件とペプチド合成への応用の下で取り外し可能なアミン保護基の新しいファミリー

チオール緩和ウレタンであるフェニルジオエチルオキシカルボニル（PHDEC）および2-ピリジチチオエチルオキシカルボニル（Pydec）保護基の発達について説明します。これらの新しいジスルフィドベースの保護基は、L-リジンのイプシロンアミノ基に導入されました。得られたアミノ酸誘導体は、固相および溶液ペプチド合成の両方に適したNα-FMOCビルディングブロックに簡単に変換されました。モデルジペプチド（ARDEC）は、古典的なペプチド結合を使用して標準的な脱保護プロトコルを使用して調製しました。それらは、水性媒体と有機媒体の両方でARDECグループを完全に除去する条件を最適化するために使用されました。PHDECとPydecは、軽度の還元条件下で15〜30分以内に切断されることがわかりました：i）DithiothreitolまたはBeta-Mercaptoethanolでの治療により、Tris.HClバッファー（pH 8.5-9.0）の水中の脱保護およびII） - 有機培地での脱保護のためのN-メチルピロリジノンのメルカプトエタノールと1,8-ジアゾビシクロ[5.4.0] UNDEC-7-エン（DBU）。ヘキサフェプチドAc-Lys-Asp-Glu-val-asp-Lys（ARDEC）-NH2の成功した固相合成は、FMOCおよびBOC保護を備えたこれらの新しいアミノ保護基の完全な直交性を明確に実証しています。いくつかのアミノ基を持つペプチドの部位特異的化学修飾のためのArdec直交脱保護戦略の有用性は、FRETドナー/アクセプターペアとしてのシアニン染料3.0およびCy 5.0を含むカスパーゼ-3プロテアーゼの蛍光基質の調製によって、まず説明されました。、および単一のビオチンレポーターグループを持つヘキサペプチドの固相合成による。

The development of phenyldithioethyloxycarbonyl (Phdec) and 2-pyridyldithioethyloxycarbonyl (Pydec) protecting groups, which are thiol-labile urethanes, is described. These new disulfide-based protecting groups were introduced onto the epsilon-amino group of L-lysine; the resulting amino acid derivatives were easily converted into N alpha-Fmoc building blocks suitable for both solid- and solution-phase peptide synthesis. Model dipeptide(Ardec)s were prepared by using classical peptide couplings followed by standard deprotection protocols. They were used to optimize the conditions for complete thiolytic removal of the Ardec groups both in aqueous and organic media. Phdec and Pydec were found to be cleaved within 15 to 30 min under mild reducing conditions: i) by treatment with dithiothreitol or beta-mercaptoethanol in Tris.HCl buffer (pH 8.5-9.0) for deprotection in water and ii) by treatment with beta-mercaptoethanol and 1,8-diazobicyclo[5.4.0]undec-7-ene (DBU) in N-methylpyrrolidinone for deprotection in an organic medium. Successful solid-phase synthesis of hexapeptides Ac-Lys-Asp-Glu-Val-Asp-Lys(Ardec)-NH2 has clearly demonstrated the full orthogonality of these new amino protecting groups with Fmoc and Boc protections. The utility of the Ardec orthogonal deprotection strategy for site-specific chemical modification of peptides bearing several amino groups was illustrated firstly by the preparation of a fluorogenic substrate for caspase-3 protease containing the cyanine dyes Cy 3.0 and Cy 5.0 as FRET donor/acceptor pair, and by solid-phase synthesis of an hexapeptide bearing a single biotin reporter group.