MCF7ヒト乳がん細胞におけるタモキシフェンおよびフルベストラント（Faslodex、ICI 182,780）に対する後天性耐性への進行中のエストロゲン受容体αおよびbetaの変化

抗エストロゲン耐性の細胞培養モデルは、タモキシフェンまたはフルベストラント（Faslodex、ICI 182,780）の添加と同時に、エストロゲン剥離の選択的圧力を同時に適用することがよくあります。。ここでは、培地への唯一の変化が10（-6）タモキシフェンまたは10（-7）Mフルベストラントの添加であったオエストロゲン維持またはエストロゲンで不足したMCF7細胞のいずれかを使用して、抗エストロゲン反応の喪失の時間コースについて説明します。エストロゲン維持とエストロゲンが不足しているモデルの両方で、タモキシフェンに対する成長反応の喪失は、フルベストラントに対する反応の喪失とは関連していませんでした。しかし、フルベストラントに対する成長反応の喪失は、タモキシフェンに対する成長反応の付随的な喪失との両方のモデルに関連していた。リアルタイムRT-PCRによるエストロゲン受容体アルファ（ERALPHA）およびエストロゲン受容体ベータ（ERBETA）mRNAとEralphaおよびErbetaタンパク質の測定は、Eralphaレベルの大幅な変化を明らかにしましたが、抗エストロゲン耐性の発生後のErbetaレベルの変化はほとんどありません。。エストロゲン維持細胞では、タモキシフェン耐性は、エラルファmRNA/タンパク質のレベルの上昇と関連していました。しかし、対照的に、エストロゲン剥離だけでエストロゲンの剥離だけでエラルファmRNA/タンパク質のレベルが増加しているのは、エストロゲンで不足しているMCF7細胞では、長期のタモキシフェン曝露がERALPHAレベルを低下させました。エストロゲンに維持された細胞におけるフルベストラントへの長期曝露は、エストロゲンが染色した細胞において、西部の免疫ブロッティングおよび非機能性（ERE-LUCレポーターまたはPS2）によって西洋の免疫ブロッティングおよび非機能性によってかろうじて検出可能であるレベルまで減少しましたが、還元はそれほど重要ではなく、これらの細胞はERE-LUCレポーター遺伝子と抗エストロゲンによってまだ阻害される可能性のある内因性PS2遺伝子の両方のエストロゲン誘導を保持しました。これは、エラルファはフルベストラントによって廃止され、状況によってはタモキシフェンによって増加することができるが、これは常に真実を保持するわけではなく、ERへの変更以外のメカニズムは抗エストロゲン耐性の成長の発達に関与しなければならないことを示しています。

Cell culture models of antioestrogen resistance often involve applying selective pressures of oestrogen deprivation simultaneously with addition of tamoxifen or fulvestrant (Faslodex, ICI 182,780) which makes it difficult to distinguish events in development of antioestrogen resistance from those in loss of response to oestrogen or other components. We describe here time courses of loss of antioestrogen response using either oestrogen-maintained or oestrogen-deprived MCF7 cells in which the only alteration to the culture medium was addition of 10(-6) M tamoxifen or 10(-7) M fulvestrant. In both oestrogen-maintained and oestrogen-deprived models, loss of growth response to tamoxifen was not associated with loss of response to fulvestrant. However, loss of growth response to fulvestrant was associated in both models with concomitant loss of growth response to tamoxifen. Measurement of oestrogen receptor alpha (ERalpha) and oestrogen receptor beta (ERbeta) mRNA by real-time RT-PCR together with ERalpha and ERbeta protein by Western immunoblotting revealed substantial changes to ERalpha levels but very little alteration to ERbeta levels following development of antioestrogen resistance. In oestrogen-maintained cells, tamoxifen resistance was associated with raised levels of ERalpha mRNA/protein. However by contrast, in oestrogen-deprived MCF7 cells, where oestrogen deprivation alone had already resulted in increased levels of ERalpha mRNA/protein, long-term tamoxifen exposure now reduced ERalpha levels. Whilst long-term exposure to fulvestrant reduced ERalpha mRNA/protein levels in the oestrogen-maintained cells to a level barely detectable by Western immunoblotting and non-functional in inducing gene expression (ERE-LUC reporter or pS2), in oestrogen-deprived cells the reduction was much less substantial and these cells retained an oestrogen-induction of both the ERE-LUC reporter gene and the endogenous pS2 gene which could still be inhibited by antioestrogen. This demonstrates that whilst ERalpha can be abrogated by fulvestrant and increased by tamoxifen in some circumstances, this does not always hold true and mechanisms other than alteration to ER must be involved in the development of antioestrogen resistant growth.