オリゴヌクレオチドプローブと2パスのチラミドシグナル増幅（2パスTSA-fish）による蛍光in situハイブリダイゼーションによるメタンゲン中のMCR mRNAの視覚化

西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識オリゴヌクレオチドプローブを伴う2パスチラミドシグナル増幅蛍光in situハイブリダイゼーション（2パスTSA-fish）を適用して、原核生物mRNAを検出しました。この研究では、メタノコッカス・ヴァンニエリのメタン生成の重要な酵素であるメチル・コエンザイムMレダクターゼ（MCR）のmRNAが標的を絞った。in situハイブリダイゼーションへのmRNAターゲットプローブの適用性は、クローンフィッシュによって検証されました。2パスTSAフィッシュの感度は、TSAフィッシュの感度よりも有意に高く、TSA作業溶液中のデキストラン硫酸塩の添加によりさらに増加したことが観察されました。2パスTSA-Fishからの信号は、TSA-Fishによって生成された弱くてむらのある信号と比較してより信頼性が高かった。

Two-pass tyramide signal amplification-fluorescence in situ hybridization (two-pass TSA-FISH) with a horseradish peroxidase (HRP)-labeled oligonucleotide probe was applied to detect prokaryotic mRNA. In this study, mRNA of a key enzyme for methanogenesis, methyl coenzyme M reductase (mcr), in Methanococcus vannielii was targeted. Applicability of mRNA-targeted probes to in situ hybridization was verified by Clone-FISH. It was observed that sensitivity of two-pass TSA-FISH was significantly higher than that of TSA-FISH, which was further increased by the addition of dextran sulphate in TSA working solution. Signals from two-pass TSA-FISH were more reliable compared to the weak, spotty signals yielded by TSA-FISH.