センチネル魚のmyxobolus cerebralisへの曝露の迅速な評価のための定量的リアルタイムPCRの評価

735度の日齢の病原体を含まないレインボートラウト（Oncorhynchus mykiss）は、少量の感染性Myxobolus cerebralis（20トライアクチノ型魚（-1））に実験的にさらされました。曝露後10日（d）、67日、および5か月（MO）を含むサンプリングには、3つの期間が選択されました。5つの診断アッセイが使用されました。（1）従来の単一ラウンドポリメラーゼ連鎖反応（PCR）、（2）ネストされたPCR、（3）リアルタイムTAQMAN PCR、（4）ペプシン - トリプシンダイジェスト、および（5）組織病理学。M. cerebralisは、3つのサンプリング時点のそれぞれで採用されたすべてのPCR診断テストによって、個々の虹のマスの間で検出されました。この結果は、これら3つの診断アプローチのいずれかが、テストされた条件下で感染した魚組織から寄生虫を検出できることを示しています。リアルタイムPCRは、67日と5か月の曝露と5か月と比較して、10日間で有意に異なっていた定量値（p <0.0001）によって示されるように、寄生虫の複製が時間的に増加するという良好な生物学的証拠を提供しました。リアルタイムPCRによる10日目のサンプリングは、5か月で存在する寄生虫の量を正確に予測するには早すぎるかもしれませんが、67日間および寄生虫後の曝露に感染する可能性が高い魚の割合を予測します。。リアルタイムPCRは、M。cerebralis感染の寄生虫負荷と結果を予測するための定量的診断PCRツールとして使用できます。

Pathogen-free rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) aged 735 degree days were experimentally exposed to a low dose of infectious Myxobolus cerebralis (20 triactinomyxons fish(-1)). Three time periods were chosen for sampling that included 10 days (d), 67 d, and 5 months (mo) post exposure. Five diagnostic assays were used: (1) conventional single-round polymerase chain reaction (PCR), (2) nested PCR, (3) real-time TaqMan PCR, (4) pepsin-trypsin digest, and (5) histopathology. M. cerebralis was detected among individual rainbow trout by all of the PCR diagnostic tests employed at each of the three sampling time points. This result demonstrates that any of these three diagnostic approaches are capable of detecting the parasite from infected fish tissues under the conditions tested. Real-time PCR provided good biological evidence that parasite replication increases temporally as shown by quantification values that were significantly different (P<0.0001) at 10 d as compared to 67 d and 5 mo postexposure. Although sampling at 10 d by real-time PCR may be too early to accurately predict quantities of the parasite that will be present at 5 mo, it does forecast the proportions of fish that are likely to be infected at 67 d and 5 mo postparasite exposure. Real-time PCR could potentially be used as a quantitative diagnostic PCR tool to predict parasite load and outcome of M. cerebralis infection.