フローサイトメトリーによる活性汚泥フロック細菌の列挙のための破壊手順の比較

背景：廃水処理プラントでは、劣化プロセスは、好気性水生環境における微生物の可変的かつ混合されたコミュニティによって行われます。活性化されたスラッジプロセスは、多くの細菌がスラッジフロックに付着している強力な微生物フロックの形成に基づいています。 方法：サイトメトリー分析には均一な細胞懸濁液が必要であり、FLOCからの細菌の剥離が必要です。この研究では、超音波処理と均質化を比較して、活性汚泥サンプルにおける細菌のサイトメトリック分析のための最も適切な前処理方法を見つけました。細菌の生存率は、核酸二重染色（NADS）プロトコル（Barbesti et al。、Cytometry 2000; 40：214-218）およびフローサイトメトリーでテストされました。 結果：各方法は、細菌の剥離に関して良好な効率を示しました。したがって、最後に、最良の治療法になる可能性のある選択は、実行可能性の結果と分析の速さの両方に基づいていました。細胞の剥離と生存率の程度に基づいて、最大値は超音波処理によって得られました（2 x 45 ''）。 結論：蛍光色素と適切な前処理と組み合わせてフローサイトメトリーを使用することは、活性汚泥サンプル中の細菌を迅速に検出および列挙するための有用な方法を表しています。

BACKGROUND: In a wastewater treatment plant, the degradation process is performed by a variable and mixed community of microorganisms in an aerobic aquatic environment. The activated-sludge process is based on the formation of strong microbial flocs where many bacteria are attached to sludge flocs. METHODS: Cytometric analysis requires an homogeneous cell suspension and so detachment of bacteria from flocs is required. In this study, sonication and homogenization were compared to find the most adequate pretreatment method for bacterial cytometric analysis in activated sludge samples. Bacterial viability was tested with a nucleic acid double-staining (NADS) protocol (Barbesti et al., Cytometry 2000;40:214-218) and on flow cytometry. RESULTS: Each method showed a good efficiency in terms of bacterial detachment; thus finally, the choice of which could be the best treatment method was based on both viability results and analysis rapidity. On the basis of the degree of cell detachment and viability, the maximum value was obtained by sonication (2 x 45''). CONCLUSIONS: The use of flow cytometry in conjunction with fluorescent dyes and an adequate pretreatment represents a useful method to rapidly detect and enumerate bacteria in activated sludge samples.