強化された緑色蛍光タンパク質を発現する組換え脳脊髄筋炎ウイルスの特性評価

強化された緑色蛍光タンパク質（EGFP）を発現する組換え脳脊髄炎ウイルス（REMCV2887A-EGFP）が生成されました。EGFP遺伝子は、EMCVの全長cDNAクローンのリーダータンパク質コーディング配列内のフレームに挿入されました。組換え液液フルレングスcDNAに由来するRNA転写産物は、in vitroで合成され、BHK-21細胞にトランスフェクトされました。組換え転写産物RNAは、BHK-21細胞に対する細胞障害効果と救助ウイルスの伝播によって示されるように、EGFPの挿入にもかかわらず感染性のままでした。BHK-21細胞の複製速度とREMCV2887A-EGFPのマウスの病原性は、親ウイルスの速度と有意な差はありませんでした。組換えウイルスは、BHK-21細胞の少なくとも5つの継代の後、感染した細胞に蛍光を生成することが示されました。ただし、連続通路に続いてEGFP発現の減少が観察され、これはEGFP遺伝子内の欠失変異の蓄積に関連していました。それにもかかわらず、EGFPの自己蛍光を使用して、感染した細胞は、ファーストパサージの組換えウイルスに感染したマウスの脳で容易に検出されました。これらのデータは、REMCV2887A-EGFPが、低い文章で使用する場合、ウイルスの普及と病原性を研究するための有用なツールである可能性があることを示しています。

A recombinant encephalomyocarditis virus (rEMCV2887A-egfp) expressing the enhanced green fluorescent protein (EGFP) was produced. The EGFP gene was inserted in frame within the leader protein coding sequence of a full-length cDNA clone of EMCV. RNA transcripts derived from the recombinant full-length cDNA were synthesized in vitro and transfected into BHK-21 cells. The recombinant transcript RNA remained infectious despite the insertion of EGFP as shown by cytopathic effects on BHK-21 cells and by propagation of the rescued virus. The replication kinetics in BHK-21 cells and the pathogenicity in mice of rEMCV2887A-egfp did not differ significantly from that of the parental virus. The recombinant virus was shown to produce fluorescence in infected cells after at least five passages in BHK-21 cells. However, a decrease of EGFP expression was observed following serial passages, and this was associated with the accumulation of deletion mutations within the EGFP gene. Nevertheless, using EGFP autofluorescence, infected cells were easily detected in the brain of mice infected with the first-passage recombinant virus. These data demonstrate that rEMCV2887A-egfp could be a useful tool to study virus dissemination and pathogenicity when used at low passages.