サルモネラTyphimurium毒性プラスミドは、プラスミドエンコードされた病原性遺伝子の陽性調節因子をコードします

サルモネラTyphimuriumの90 kbの病原性プラスミドは、Peyerの斑点を超えて腸間膜リンパ節および口頭接種マウスの脾臓への浸潤に必要です。以前に特定された14 kbの病原性領域の左側にある2つのTN5挿入（P. A. GuligおよびR. Curtiss III、Infect。Immun。58：3262-3271、1988）と互いに272 bpをマッピングすることは、脾臓に反対効果を示しました。経口接種後のマウスの感染。SPVR23 :: TN5は、脾臓感染を1,000倍減少させましたが、SPV-14 :: TN5変異体が、変異および野生型S. Tyhimuriumの混合物を与えたマウスを与えたマウスを与えたマウスで27倍に脾臓感染の野生型S. Tyhimuriumを1,000倍減少させました。SPVR23 :: TN5は、33,000分子量タンパク質を指定する891-bpオープンリーディングフレームのみをコードする挿入シーケンスを備えた病原性プラスミドサブクローンによって補完されました。このオープンリーディングフレームのアミノ酸配列は、陽性の調節タンパク質のLYSRファミリーのメンバーと有意な相同性を持っていました。したがって、遺伝子のSPVRと呼ばれました（サルモネラプラスミド毒性）。他の病原性遺伝子に対するSPVRの可能な調節効果を調べるために、下流の毒性遺伝子SPVBにLACZオペロン融合を構築しました。LACプロモーターの後ろでサブクローニングされたSPVRがSPVB-LACZオペロン融合にトランスの別のプラスミドで提供されたとき、SPVBの転写は15倍増加しました。S. Typhimuriumに競争上の優位性を与えたSPV-14 :: TN5は、CISにおけるSPVR-LACZオペロン融合の発現を増加させました。したがって、SPVRはSPVBの陽性調節因子であり、S。typhimuriumの必須毒性遺伝子です。SPVRがLACプロモーターの背後にサブクローニングされているのとは対照的に、毒性プラスミドに存在する野生型SPVR遺伝子は、サルモネラがLブイヨンの対数位相に成長したときにトランスのSPVB-LACZを積極的に調節するように機能しませんでした。感染中にin vivoで活性化されます。

The 90-kb virulence plasmid of Salmonella typhimurium is necessary for invasion beyond the Peyer's patches to the mesenteric lymph nodes and spleens of orally inoculated mice. Two Tn5 insertions located on the left side of a previously identified 14-kb virulence region (P. A. Gulig and R. Curtiss III, Infect. Immun. 58:3262-3271, 1988) and mapping 272 bp from each other exhibited opposite effects on splenic infection of mice after oral inoculation. spvR23::Tn5 decreased splenic infection by 1,000-fold, whereas a spv-14::Tn5 mutant outcompeted wild-type S. typhimurium for splenic infection by 27-fold in mice fed mixtures of mutated and wild-type S. typhimurium. spvR23::Tn5 was complemented by a virulence plasmid subclone with an insert sequence encoding only an 891-bp open reading frame specifying a 33,000-molecular-weight protein. The amino acid sequence of this open reading frame had significant homology to members of the LysR family of positive regulatory proteins; thus, the gene was named spvR (salmonella plasmid virulence). To examine the possible regulatory effects of spvR on other virulence genes, we constructed a lacZ operon fusion in a downstream virulence gene, spvB. When spvR subcloned behind the lac promoter was provided on a separate plasmid in trans to the spvB-lacZ operon fusion, transcription of spvB increased 15-fold. spv-14::Tn5, which conferred a competitive advantage to S. typhimurium, increased the expression of a spvR-lacZ operon fusion in cis. spvR is therefore a positive regulator of spvB and an essential virulence gene of S. typhimurium. As opposed to having spvR subcloned behind the lac promoter, the wild-type spvR gene present on the virulence plasmid did not function to positively regulate spvB-lacZ in trans when salmonellae were grown to the log phase in L broth, suggesting that this regulatory system is activated in vivo during infection.