SH-SY5Y神経芽細胞腫細胞の慢性ムスカリン刺激は、イノシトール1,4,5-三リン酸作用のイノシトール1,4,5-三リン酸誘導Ca2+動員とイノシトール1,4,5-三胞性結合結合結合の並列阻害を抑制します。

ホスホイノシチド媒介シグナル伝達経路の慢性活性化がCa（2+） - イノシトール1,4,5-三リン酸（INSP3）の動員作用を修正する可能性を調べました。SH-SY5Yヒト神経芽細胞腫細胞をカルバコルに曝露し、電気的に透過処理し、45CA2+を搭載し、外因性INSP3に応答して45CA2+の動員を評価しました。対照透過性細胞では、INSP3は隔離された45CA2 +（EC50 = 0.32 +/- 0.05 microM）の65 +/- 2％を放出しました。カルバコルによる前治療は、最大INSP3誘導45CA2 +放出の両方を減らしました（それぞれ約3時間と6時間で半分最大および最大阻害を伴う34 +/- 3％に）0.13 microM）。カルバコルのこの阻害効果は、約5ミクロムで半軸であり、ムスカリン受容体によって媒介され、アゴニストの撤退後も可逆的でした。ホルボール12,13-ジブレートによる前処理は、INSP3の最大効果を変えず、EC50を2倍にしました。CA2+恒常性の変化に起因するカルバコル前処理の阻害効果が近づいていないことを示唆する証拠。イオノマイシンとタプシガルギンによって誘導される45CA2+の取り込みと放出は両方とも、コントロールおよび前処理された透過性細胞で同一であり、放出されたCa2+の再取り込みの特性と同様に。対照的に、Carbacholの前処理は、insp3（KD = 64 +/- 7 nm）の親和性を変えることなく、[32p] Insp3結合部位の密度を2.0 +/- 0.1から1.0 +/- 0.1 pmol/mgタンパク質に減少させました。INSP3への応答性の低下については、時間コースと本質的に同じです。この効果は、ホルボール12,13-ジブレートによる細胞の前処理によって模倣されませんでした。これらのデータは、ホスホイノシチド加水分解の慢性活性化がINSP3受容体の存在量を減少させることができ、これによりINSP3感受性Ca2+貯蔵のサイズが減少することを示しています。おそらくプロテインキナーゼCを介したイベントと組み合わせて、この修飾は、Carbachol誘発性の抑制の抑制を説明しているようです。カルバコルの添加後少なくとも24時間、細胞内Insp3質量が基底より上で上昇したままであるため、Ca（2+）-Insp3の動員活性は、細胞内Ca2+が動員される程度を制限できる細胞刺激に対する重要な適応反応を表しています。。

The possibility that chronic activation of the phosphoinositide-mediated signaling pathway modifies the Ca(2+)-mobilizing action of inositol 1,4,5-trisphosphate (InsP3) was examined. SH-SY5Y human neuroblastoma cells were exposed to carbachol, permeabilized electrically, loaded with 45Ca2+, and 45Ca2+ mobilization in response to exogenous InsP3 was assessed. In control permeabilized cells, InsP3 released 65 +/- 2% of sequestered 45Ca2+ (EC50 = 0.32 +/- 0.05 microM). Pre-treatment with carbachol reduced both maximal InsP3-induced 45Ca2+ release (to 34 +/- 3%, with half-maximal and maximal inhibition at approximately 3 and 6 h, respectively) and the potency of InsP3 (EC50 = 0.92 +/- 0.13 microM). This inhibitory effect of carbachol was half-maximal at approximately 5 microM, was mediated by muscarinic receptors, and was reversible following withdrawal of agonist. Pretreatment with phorbol 12,13-dibutyrate did not alter the maximal effect of InsP3 but doubled its EC50. Evidence suggesting that the inhibitory effects of carbachol pretreatment resulted from altered Ca2+ homeostasis was not forthcoming; both 45Ca2+ uptake and release induced by ionomycin and thapsigargin were identical in control and pretreated permeabilized cells, as were the characteristics of reuptake of released Ca2+. In contrast, carbachol pretreatment, without altering the affinity of InsP3 (Kd = 64 +/- 7 nM), reduced the density of [32P]InsP3-binding sites from 2.0 +/- 0.1 to 1.0 +/- 0.1 pmol/mg protein with a time course essentially identical to that for the reduction in responsiveness to InsP3. This effect was not mimicked by pretreatment of cells with phorbol 12,13-dibutyrate. These data indicate that chronic activation of phosphoinositide hydrolysis can reduce the abundance of InsP3 receptors and that this causes a reduction in size of the InsP3-sensitive Ca2+ store. This modification, possibly in conjunction with a protein kinase C-mediated event, appears to account for the carbachol-induced suppression of InsP3 action. As intracellular InsP3 mass remained elevated above basal for at least 24 h after addition of carbachol, suppression of the Ca(2+)-mobilizing activity of InsP3 represents an important adaptive response to cell stimulation that can limit the extent to which intracellular Ca2+ is mobilized.