ミクロスフィアベースのフローサイトメトリーアッセイの検出器としてのスーパークーミング

背景：蛍光コンジュゲートポリマーは、エネルギーまたは電子移動を介した反対に充電されたクエンチャーによるクエンチング（スーパークエンチング）に対する高蛍光量子収量と感度の向上を示します。蛍光ポリマーとそのクエンチャーは、ポリマーが粒子にコーティングされているビーズベースのバイオセンサーアプリケーションで使用されます。この作業では、フローサイトメトリックアッセイに使用できるミクロスフェアのスーパークーミングを利用する検出方法を調査します。 方法：ミクロスフェアは、蛍光カチオン性ポリエレクトロライトポリ（p-フェニレン - エチニレン）（PPE）でコーティングされ、9,10-アントラキノン-2,6-ジスルホン酸（AQS）によるスーパーキングは、存在下および存在下および中の蛍光測定法により調べられました。陰イオン性脂質二重層の形でスーパーキングする障壁がない。 結果：フローサイトメトリーは、蛍光の高レベルの減少が観察されたAQSによって、ミクロスフェア上のPPE（MS-PPE）上のPPEのスーパーキングを検出しました。さまざまな濃度のAQをMS-PPEに追加すると、0.8x10（6）M-1の船尾型消光定数が得られました。MS-PPEの周りにアニオン性脂質二重層を形成している間、AQによるスーパーキーンチの障壁として作用し、脂質二重層を混乱させることで、スーパーキングが行われました。 結論：ミクロスフェアの蛍光の検出におけるフローサイトメトリーの感度と、蛍光結合ポリマーの増幅された消光感度はどちらも、他の蛍光法と従来の消光検出よりも利点を提供します。この研究では、フローサイトメトリーの新しいツールとして蛍光ポリマーのスーパークーミングを使用したため、方法と検出器の両方が提供する利点を組み合わせていました。さらに、私たちは、新しいバイオセンシングアプリケーションを提供するために、スーパーキングを媒介する際に、サポートされている脂質二重層の形成と混乱を採用しました。

BACKGROUND: Fluorescent conjugated polymers display high fluorescence quantum yields and enhanced sensitivity to quenching (superquenching) by oppositely charged quenchers through energy or electron transfer. Fluorescent polymers and their quenchers are used in bead-based biosensor applications where the polymers are coated on particles. In this work, we investigate a detection method that utilizes superquenching on microspheres, which can be used for flow cytometric assays. METHODS: Microspheres were coated with the fluorescent cationic polyelectrolyte poly(p-phenylene-ethynylene) (PPE), and its superquenching by 9,10-anthraquinone-2,6-disulfonic acid (AQS) was examined by fluorometric methods in presence and in absence of a barrier to superquenching in the form of an anionic lipid bilayer. RESULTS: Flow cytometry detected superquenching of PPE on microspheres (MS-PPE) by AQS where high levels of reduction in fluorescence were observed. Adding different concentrations of AQS to MS-PPE yielded a Stern-Volmer quenching constant of 0.8x10(6) M-1. While forming an anionic lipid bilayer around the MS-PPE acted as a barrier to superquenching by AQS, disrupting the lipid bilayer allowed superquenching to take place. CONCLUSIONS: The sensitivity of flow cytometry in detecting fluorescence of microspheres and the amplified quenching sensitivity of fluorescent conjugated polymers both offer advantages over other fluorometric methods and conventional quenching detection. This study used superquenching of fluorescent polymers as a new tool in flow cytometry, thus combining the advantages offered by both method and detector. In addition, we employed the formation and the disruption of a supported lipid bilayer in mediating superquenching to offer new biosensing applications.