RMA-S細胞上の空の主要組織適合性複合体分子のペプチド負荷により、一次細胞毒性Tリンパ球応答の誘導が可能になります

抗原処理障害変異細胞株RMA-Sは、外因性の免疫原性ペプチドを効率的にロードできるペプチドを欠いている細胞表面主要組織適合性複合体（MHC）クラスI分子で発現します。現在、親のRMA細胞とは異なり、ウイルスペプチド負荷のRMA-S細胞が、Telper細胞に依存しない方法で、in vitroで一次細胞毒性Tリンパ球（CTL）応答を誘導できると報告しています。これは、センダイウイルス核タンパク質のH-2KB結合ペプチドと、RMAおよびRMA-S細胞の起源株であるC57BL/6マウスの反応する脾臓細胞を伴うアデノウイルス5型E1Aタンパク質のH-2DB結合ペプチドについて示されました。。原発性センダイペプチド誘発CTL溶解ペプチド充填およびウイルス感染細胞の両方。低温（22度-26度C）でのRMA-S細胞の前培養は、細胞表面での空のMHCクラスI分子の量を増加させ、一次CTL応答の誘導に必要なペプチド濃度を減少させます。ペプチド負荷RMA-S細胞によって誘導される一次ペプチド特異的CTL応答は、CD4+細胞およびMHCクラスII+細胞独立です。CTL応答誘導は、培養中の抗CD8モノクローナル抗体の存在によってブロックされます。直接ペプチド結合研究では、RMA-S細胞を使用したRMA-S細胞の空のMHC分子の効率的な負荷を確認し、RMA細胞と比較してRMA-S細胞ごとに2.5倍多くのペプチド結合を示します。RMAとRMA-S細胞間の一次応答誘導の違いを説明する追加因子は、これらの応答のCD8依存性に関連しています。無関係なペプチドで占められたMHCクラスI分子（RMAに存在する大部分、RMA-Sにはほとんど存在しない）は、CD8分子と関連するMHC/ペプチド複合体との相互作用に干渉する可能性があります。結果は、in vitro免疫に基づくペプチドの新しい戦略を描写し、CD8+細胞毒性T細胞応答を誘発します。

The antigen processing-defective mutant cell line RMA-S expresses at the cell surface major histocompatibility complex (MHC) class I molecules devoid of peptide that can be efficiently loaded with exogenous immunogenic peptides. We now report that viral peptide-loaded RMA-S cells, unlike parental RMA cells, can induce primary cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses in vitro, in a T helper cell-independent fashion. This was shown for an H-2Kb-binding peptide of Sendai virus nucleoprotein and an H-2Db-binding peptide of adenovirus type 5 E1A protein with responding spleen cells of C57BL/6 mice, the strain of origin of RMA and RMA-S cells. Primary Sendai peptide-induced CTL lyse both peptide-loaded and virus-infected cells. Pre-culture of RMA-S cells at low temperature (22 degrees - 26 degrees C), which increases the amount of empty MHC class I molecules at the cell surface, decreases the peptide concentrations required for the induction of primary CTL responses. Primary peptide-specific CTL responses induced by peptide-loaded RMA-S cells are CD4+ cell- and MHC class II+ cell-independent. CTL response induction is blocked by the presence of anti-CD8 monoclonal antibody during culture. Direct peptide binding studies confirm the efficient loading of empty MHC molecules on RMA-S cells with peptide and show 2.5-fold more peptide bound per RMA-S cell compared to RMA cells. An additional factor explaining the difference in primary response induction between RMA and RMA-S cells is related to the CD8 dependence of these responses. MHC class I molecules occupied with irrelevant peptides (a majority present on RMA, largely absent on RMA-S) may interfere in the interaction of the CD8 molecule with relevant MHC/peptide complexes. The results delineate a novel strategy of peptide based in vitro immunization to elicit CD8+ cytotoxic T cell responses.