ヒト血液中のパラオキソナーゼ3活性のRP-HPLC測定

現在の研究の目的は、基質としてシンバスタチン（SV）を含むヒト血清のパラオキソナーゼ3（PON3）活性測定の条件を確立することでした。PON3の活性は、早期のアテローム性動脈硬化症およびスタチン療法の有効性に対する感受性の良好な早期予測因子と見なされています。使用された方法は、血清とのインキュベーション後にSVから解放され、その後反応混合物の脱タンパク化を行ったSVとベータ、デルタジヒドロキシアシドシンバスタチン（SVA）を定量化します。SVとSVAの分離は、1.5 mL min（-1 min（-1）の移動相として、pH 4.5（v/v、70：30）のアセトニトリル-K-リン酸緩衝液を使用したIsocratic溶出によるLC（18）カラムで行われました。）。239 nmの波長での紫外線吸収に基づく検出は、SVとSVAの同時アッセイに対して信頼できました。適用された方法は、小児の血液中の低シムバスタチンラクトンヒドロラーゼ（スタチナーゼ）活性の測定のために、十分に敏感で、正確で正確でした（1.97-6.86 PMOL（-1）ML（-1））。この方法は、0.5-6マイクログml（-1）（1.194-14.3 nmol ml（-1））の測定範囲にわたる良好な線形性によって特徴付けられます。SVの検出限界（LOD）と定量（LOQ）は、それぞれ3.1および10.4 ng ml（-1）でした。SVAの場合、LODとLOQは20ミクロールサンプルでそれぞれ4.7および14.44 ng ml（ - ）でした。基質としてのSVを使用したヒト血液血清におけるPON3スタチナーゼ活性の精度と精度は満足のいくものであり、生体分析法では許容可能でした。

The aim of the present work was to establish conditions for paraoxonase 3 (PON3) activity determination in human blood serum with simvastatin (SV) as a substrate. The activity of PON3 is considered as a good early predictor of susceptibility to premature atherosclerosis as well as of statin therapy effectiveness. The method used quantifies the SV and beta,delta-dihydroxyacid simvastatin (SVA) liberated from SV after incubation with blood serum, followed by deproteinization of the reaction mixture. Separation of SV and SVA was performed on an LC(18) column by isocratic elution with acetonitrile-K-phosphate buffer of pH 4.5 (v/v, 70:30) as a mobile phase at flow rate of 1.5 ml min(-1). Detection based on ultraviolet absorption at a wavelength of 239 nm was reliable for the simultaneous assay of SV and SVA. The applied method was sufficiently sensitive, precise and accurate for determination of low simvastatin lactone hydrolase (statinase) activity in blood serum of children (1.97-6.86 pmol min(-1) ml(-1)). The method is characterized by good linearity over the measurement range of 0.5-6 microg ml(-1) (1.194-14.3 nmol ml(-1)). Limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ) for SV were 3.1 and 10.4 ng ml(-1), respectively. In case of SVA, LOD and LOQ were 4.7 and 14.44 ng ml(-) for a 20 microl sample, respectively. Precision and accuracy of PON3 statinase activity determination in human blood serum with SV as substrate were satisfactory and acceptable for bioanalytical methods.