非皮膚溶解性「トリプシン様」酵素：アラチンの精製と特性

タンパク質分解基質の使用により、ベンゾイル-Dl-アルギニン-P-ニトロアニリドとベンゾイル-L-アルギニンエチルエステルは、酵素アラチャインが非男なピーナッツのアセトン粉末から325倍精製されました。ベンゾイル-DL-アルギニン-P-ニトロアニリドの加水分解に最適なpHは、トリス緩衝液で8.1であり、ベンゾイル-L-アルギニンエチルエステルの場合は7.5でした。最も純粋な割合は、ディスクジェル電気泳動に1〜3つのマイナーバンドを備えた1つのメインバンドを示しました。主要なタンパク質成分のs（20、w）は6.20でした。ベンゾイル-DL-アルギニン-P-ニトロアニリドの加水分解のための活性化のエネルギーは、16キロカロリーと計算されました。ベンゾイル-DL-アルギニン-P-ニトロアニリドのミカリス定数は10ミクロモルで、ベンゾイル-L-アルギニンエチルエステルは110ミクロモルでした。酵素は、基質としてカゼイン、ジメチルカゼイン、またはウシ血清アルブミンを使用した活性を本質的に示した。酵素によって多数のペプチドが加水分解され、テストされたペプチドに耐性があるL-ロイシル-L-チロシンのみが。結果は、アラチャインが「トリプシン様」プロテアーゼではなく、ペプチドヒドロラーゼであることを示唆しています。

By the use of the proteolytic substrates benzoyl-dl-arginine-p-nitroanilide and benzoyl-l-arginine ethyl ester the enzyme arachain has been purified 325-fold from acetone powders of ungerminated peanuts. The pH optimum for the hydrolysis of benzoyl-dl-arginine-p-nitroanilide was 8.1 in tris buffer, and for benzoyl-l-arginine ethyl ester was 7.5 using N - 2 - hydroxyethylpiperazine - N' - 2 - ethanesulfonic acid buffer. The purest fraction showed one main band with one to three minor bands on disc gel electrophoresis. The major protein component had an S(20,w) of 6.20. The energy of activation for the hydrolysis of benzoyl-dl-arginine-p-nitroanilide was calculated to be 16 kilocalories. The Michaelis constant for benzoyl-dl-arginine-p-nitroanilide was 10 micromolar and for benzoyl-l-arginine ethyl ester was 110 micromolar. The enzyme showed essentially no activity with casein, dimethyl casein, or bovine serum albumin as substrates. A large number of peptides were hydrolyzed by the enzyme, only l-leucyl-l-tyrosine being resistant of the peptides tested. The results suggest that arachain is not a "trypsin-like" protease but is a peptide hydrolase.