小麦アリューロン細胞におけるアルファアミラーゼの可能な前駆体の合成

小麦アリューロン（Triticum aestivum）のアルファアミラーゼは、ポリソームを使用したS-150小麦胚芽読解システムと、ポリデニル酸[Poly（a）] - 濃縮RNAを使用したメッセンジャーRNA依存性網状赤血球溶解物システムで合成されました。この生成物は、ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動、α-アミラーゼの特定のラムダグロブリンによる沈殿、およびタンパク質分解によって分析されました。2つの免疫沈降した生成物が、読み出しシステムから合成されました。これは、ドデシル硫酸塩 - ポリアクリルアミドゲルの本物のアルファアミラーゼと偶然に移動する主な種です。推定前の前駆体、1,500のダルトンが大きく、明らかでしたが、あまり豊富でした。2つのポリペプチド間の関係は、黄色ブドウ球菌V8プロテアーゼを使用したタンパク質分解によって確立されました。少なくとも9つの断片が生成され、両方の種で同一でした。ポリ（A）濃縮RNAは、網状赤血球溶解物システムの推定前駆体のみを合成しました。アルファアミラーゼの成熟サイズの前駆体を処理しようとする試みは失敗しました。これらの発見は、シグナル仮説（膜を横切るタンパク質の輸送のために提案されている）およびアリューロン細胞におけるα-アミラーゼの分泌モードに関連して議論されています。

alpha-Amylase from wheat aleurone (Triticum aestivum) was synthesized in a S-150 wheat germ readout system using polysomes, and a messenger RNA-dependent reticulocyte lysate system using polyadenylic acid [poly(A)]-enriched RNA. The product was analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, precipitation by specific lambda-globulin for alpha-amylase, and proteolysis. Two immunoprecipitated products were synthesized from the readout system, the predominant species migrating coincidentally with authentic alpha-amylase on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels. A putative precursor, 1,500 daltons larger, was evident but was less abundant. The relationship between the two polypeptides was established by proteolytic analysis using Staphylococcus aureus V8 protease. At least nine fragments were generated and were identical in both species. The poly(A)-enriched RNA synthesized only the putative precursor in the reticulocyte lysate system. Attempts to process the precursor to the mature size of alpha-amylase failed. These findings are discussed in connection with the signal hypothesis (proposed for the transport of proteins across membranes) and the mode of secretion of alpha-amylase in aleurone cells.