部分的に精製された大豆結節ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの代謝物調節

ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ（PEPC）は、大豆（グリシンマックスL.メラー）の結節から40倍精製され、タンパク質あたりミリグラムあたり5.2ユニット、推定純度28％の特定の活性に精製されました。ネイティブおよびサブユニットの分子量は、それぞれ440および100キロダルトンであると判断され、酵素がホモットターマーであることを示しています。ホスホエノールピルビン酸（PEP）濃度およびさまざまなエフェクターに対する酵素活性の反応は、アッセイpHおよびアッセイへのグリセロール添加の影響を受けました。グリセロールの非存在下でのpH 7では、k（m）（pep）はグリセロールの存在下またはpH 8でpH 7よりも約2倍大きかった。それぞれのK（M）（PEP）値よりも大幅に低いことがわかりました。グルコース-6-リン酸、フルクトース-6-リン酸、グルコース-1-リン酸、およびジヒドロキシアセトンリン酸ジヒドロキシアセトンは、グリセロールの非存在下でpH 7でPEPCを活性化しましたが、他のアッセイ条件下では影響はありませんでした。マロン、アスパラギン酸、グルタミン酸、クエン酸塩、および2-オキソグルタル酸塩は、グリセロールの非存在下でpH 7でPEPCの強力な阻害剤でしたが、その効果は、PHを8および/またはグリセロールを添加することで増加させました。対照的に、他のアッセイ条件下よりもグリセロールの非存在下では、3-ホスホグリセ酸および2-ホスホグリセ酸がpH 7ではあまり効果的ではありませんでした。無機リン酸（最大20ミリモル）は、グリセロールの非存在下ではpH 7の活性化因子でしたが、他のアッセイ条件下では阻害剤でした。PEPCの代謝物調節の可能性のある重要性は、マメ科植物結節代謝におけるこの酵素の提案された機能に関連して議論されています。

Phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) was purified 40-fold from soybean (Glycine max L. Merr.) nodules to a specific activity of 5.2 units per milligram per protein and an estimated purity of 28%. Native and subunit molecular masses were determined to be 440 and 100 kilodaltons, respectively, indicating that the enzyme is a homotetramer. The response of enzyme activity to phosphoenolpyruvate (PEP) concentration and to various effectors was influenced by assay pH and glycerol addition to the assay. At pH 7 in the absence of glycerol, the K(m) (PEP) was about twofold greater than at pH 7 in the presence of glycerol or at pH 8. At pH 7 or pH 8 the K(m) (MgPEP) was found to be significantly lower than the respective K(m) (PEP) values. Glucose-6-phosphate, fructose-6-phosphate, glucose-1-phosphate, and dihydroxyacetone phosphate activated PEPC at pH 7 in the absence of glycerol, but had no effect under the other assay conditions. Malate, aspartate, glutamate, citrate, and 2-oxoglutarate were potent inhibitors of PEPC at pH 7 in the absence of glycerol, but their effectiveness was decreased by raising the pH to 8 and/or by adding glycerol. In contrast, 3-phosphoglycerate and 2-phosphoglycerate were less effective inhibitors at pH 7 in the absence of glycerol than under the other assay conditions. Inorganic phosphate (up to 20 millimolar) was an activator at pH 7 in the absence of glycerol but an inhibitor under the other assay conditions. The possible significance of metabolite regulation of PEPC is discussed in relation to the proposed functions of this enzyme in legume nodule metabolism.