アデノシンA1受容体は、ヒト気管支平滑筋細胞におけるカルシウムの動員を媒介します

アデノシンは気道平滑筋の収縮を刺激しますが、メカニズムは、マスト細胞と神経からの収縮アゴニストの放出に応じて、間接的に広く考えられています。目標は、アデノシン自体がヒト気管支平滑筋細胞（HBSMC）のカルシウムシグナル伝達を直接調節するかどうかを判断することでした。正常な被験者からのHBSMCの一次培養物にFura 2-AMを搭載し、サイトゾルカルシウム濃度（[Ca（2+）]（i））は、単一細胞を画像化することにより比率的に決定されました。非選択的アデノシン受容体アゴニスト、5'-N-エチルカルボキサミドアデノシン（NECA）、およびアデノシンA（1）受容体アゴニスト、N（6） - シクロペンチルアデノシン（CPA）はどちらも[CA（2+）]で急速に急速に急速に増加しました。（私）。対照的に、2-p-（2-カルボキシエチル）フェネチルアミノ-5'-n-エチルカルボキサミド - アデノシン（100 nM）またはN（6） - （3-ヨードベンジル） - アデノシン-5'-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N（6） - （100 nM）またはN（6） - （- メチルロンアミド（100 nM）、それぞれアデノシンA（2a）受容体とアデノシンA（3）受容体の選択的アゴニスト。NECAおよびCPAに対するカルシウム応答は、アデノシンA（1）受容体拮抗薬である8-シクロペンチル-1,3-ジプロピルキサンチン、および百日咳毒素（PTX）によって阻害されました。他の実験では、NECAは細胞外カルシウムの非存在下でカルシウムの過渡現象を刺激しましたが、細胞が空の細胞内カルシウム貯蔵にシクロピアゾン酸またはタプシガルギンでプレインキュベートした場合はそうではありません。カルシウム応答は、Xestospongin Cおよび2-アミノエトキシジフェニルボラン、イノシトール三症（IP（3））受容体の阻害剤、およびホスホリパーゼCの阻害剤であるU73122によって減衰しました。PTX感受性Gタンパク質に依存するメカニズムによる細胞内カルシウム貯蔵、およびIP（3）シグナル伝達。これらの発見は、HBSMCに対する確立された間接的な影響に加えて、アデノシンも収縮シグナル伝達経路に直接的な影響を与えることを示唆しています。

Adenosine stimulates contraction of airway smooth muscle, but the mechanism is widely considered indirect, depending on release of contractile agonists from mast cells and nerves. The goal was to determine whether adenosine, by itself, directly regulates calcium signaling in human bronchial smooth muscle cells (HBSMC). Primary cultures of HBSMC from normal subjects were loaded with fura 2-AM, and cytosolic calcium concentrations ([Ca(2+)](i)) were determined ratiometrically by imaging single cells. The nonselective adenosine receptor agonist, 5'-N-ethylcarboxamidoadenosine (NECA), and the adenosine A(1) receptor agonist, N(6)-cyclopentyladenosine (CPA), both stimulated rapid, transient increases in [Ca(2+)](i). In contrast, there were no calcium responses to 2-p-(2-carboxyethyl)phenethylamino-5'-N-ethylcarboxamido-adenosine (100 nM) or N(6)-(3-iodobenzyl)-adenosine-5'-N-methyluronamide (100 nM), selective agonists at adenosine A(2A) receptors and adenosine A(3) receptors, respectively. Calcium responses to NECA and CPA were inhibited by 8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine, an adenosine A(1) receptor antagonist, and by pertussis toxin (PTX). In other experiments, NECA stimulated calcium transients in the absence of extracellular calcium, but not when cells were preincubated in cyclopiazonic acid or thapsigargin to empty intracellular calcium stores. Calcium responses were attenuated by xestospongin C and 2-aminoethoxydiphenylborane, inhibitors of inositol trisphosphate (IP(3)) receptors, and by U73122, an inhibitor of phospholipase C. It was concluded that stimulation of adenosine A(1) receptors on HBSMC rapidly mobilizes intracellular calcium stores by a mechanism dependent on PTX-sensitive G proteins, and IP(3) signaling. These findings suggest that, in addition to its well-established indirect effects on HBSMC, adenosine also has direct effects on contractile signaling pathways.