ポリペプチド輸送ポリペプチドOATP-B（OATP2B1）の主要な寄与ヒト腸のCACO-2細胞によるエストロン-3-硫酸塩の頂端摂取へ

ヒト有機アニオン輸送ポリペプチドOATP-B（OATP2B1）は、小腸上皮細胞の頂端膜で発現するpH感受性輸送体です。この研究では、そのホモログOATP-D（OATP3A1）およびOATP-E（OATP4A1）のものと比較して、CACO-2細胞の[3H]エストロン-3硫酸塩の取り込みへのOATP-Bの寄与を調べました。。免疫細胞化学的研究により、OATP-BはCACO-2細胞の頂端膜で発現していることが明らかになりました。CACO-2細胞による[3H]エストロン-3-硫酸塩の取り込みはNa+非依存性であり、いくつかの有機陰イオンによって阻害されました。KM値が1.81 microM、1.40 mmの二相飽和動態を示しました。OATP-B（HEK293/OATP-B）を安定して発現するヒト胚性腎臓（HEK）293細胞による[3H]エストロン-3-硫酸塩の取り込みもNa+非依存性であり、いくつかの有機陰イオンによって阻害されました。OATP-B（1.56 microM）によるエストロン-3-硫酸吸収のkm値は、Caco-2細胞で観察された高親和性成分についてそれに近いものでした。OATP-BのmRNA発現レベルは、CACO-2細胞および健康なボランティアのヒト空腸生検でOATP-DまたはOATP-Eのそれよりも高かった。OATP-B mRNA発現に正規化された[3H]エストロン-3-硫酸取り込みの値は、CACO-2細胞およびHEK293/OATP-B細胞で類似していた。mRNA発現ごとのOATP-Bの特異的活性は、OATP-DおよびOATP-Eの特異的活性よりもはるかに高かった。[3H] HEK293/OATP-B細胞から調製された膜小胞によるエストロン-3硫酸塩の取り込みは、内向きのH+勾配の存在下でオーバーシュート現象を示し、H+勾配はエストロン-3硫酸塩輸送の駆動力であることを示唆しています。OATP-Bによって。これらの結果は、OATP-Bが主にCACO-2細胞におけるエストロン-3-硫酸塩の頂端摂取の原因であることを示唆しています。

Human organic anion transporting polypeptide OATP-B (OATP2B1) is a pH-sensitive transporter expressed in the apical membranes of small intestinal epithelial cells. In this study, we have examined the contribution of OATP-B to the uptake of [3H]estrone-3-sulfate in Caco-2 cells in comparison with those of its homologs OATP-D (OATP3A1) and OATP-E (OATP4A1). Immunocytochemical study revealed that OATP-B is expressed in the apical membranes of Caco-2 cells. The uptake of [3H]estrone-3-sulfate by Caco-2 cells was Na+-independent and inhibited by several organic anions. It showed biphasic saturation kinetics with Km values of 1.81 microM and 1.40 mM. The uptake of [3H]estrone-3-sulfate by human embryonic kidney (HEK) 293 cells stably expressing OATP-B (HEK293/OATP-B) was also Na+-independent and inhibited by several organic anions. The Km value for estrone-3-sulfate uptake by OATP-B (1.56 microM) was close to that for the high-affinity component observed in Caco-2 cells. The mRNA expression level of OATP-B was higher than that of OATP-D or OATP-E in Caco-2 cells and in human jejunum biopsies from healthy volunteers. The values of [3H]estrone-3-sulfate uptake normalized to OATP-B mRNA expression were similar in Caco-2 cells and HEK293/OATP-B cells. The specific activity of OATP-B per mRNA expression was much higher than that of OATP-D and OATP-E. [3H]Estrone-3-sulfate uptake by membrane vesicles prepared from HEK293/OATP-B cells exhibited an overshoot phenomenon in the presence of an inwardly directed H+ gradient, suggesting that an H+ gradient is the driving force of estrone-3-sulfate transport by OATP-B. These results suggest that OATP-B is predominantly responsible for the apical uptake of estrone-3-sulfate in Caco-2 cells.