ガラクトースの存在下でのCHO細胞による乳酸消費量に関する考慮事項

T-PAを生成するCHO細胞株を、グルタミン酸とグルコースまたはガラクトースを使用して培養して、代謝末期の形成の形成を減らし、したがってプロセスを改善しました。2つの異なるレベル（5および20 mm）またはグルコースとガラクトース（それぞれ5および20 mm）でグルコースを使用したグルタミン酸（6 mm）を使用したバッチ培養では、細胞培養パラメーターの顕著な違いが証明されました。20 mmのグルコースの場合、培地に乳酸が蓄積して通常の細胞パターンが観察されました。5 mMグルコースの場合、グルコースの枯渇により細胞の成長が停止し、細胞の成長を十分に支持することなく、排泄された乳酸の使用の限られた使用のみが観察されました。しかし、グルコース5 mMとガラクトース20 mMを一緒に使用すると、細胞は最初にグルコースを消費し、興味深いことに、第2フェーズでは、内因性乳酸の同時消費でガラクトースで成長し続けました。これらの条件下では、コントロールとして使用される20 mMグルコースの成長に関して、細胞の成長も改善されました。この代謝挙動は、代謝フラックス分析を使用してさらに調査され、生成された乳酸がTCAサイクルを通じて酸化的代謝に使用されないことを示唆しています。消費された乳酸の代謝運命について説明します。

A CHO cell line producing t-PA was cultured using glutamate and glucose or galactose to decrease the formation of metabolic end-products and therefore improving the process. In batch cultures using glutamate (6 mM) with glucose at two different levels (5 and 20 mM) or with glucose and galactose (5 and 20 mM, respectively) a remarkable difference in cell culture parameters was evidenced. For 20 mM glucose, a usual cell pattern was observed with lactate built-up in the medium. For 5 mM glucose, cell growth was arrested due to glucose depletion and only a limited use of the excreted lactate could be observed, not supporting cell growth sufficiently. However, when glucose 5 mM and galactose 20 mM were used together, cells consumed the glucose first and, interestingly, in a second phase they continued growing on galactose with the simultaneous consumption of the endogenous lactate. Under these conditions, cell growth was even improved with respect to growth on 20 mM glucose, used as a control. This metabolic behavior is further investigated by using metabolic flux analysis, suggesting that the lactate produced is not used in the oxidative metabolism through the TCA cycle. Metabolic fate of the lactate consumed is discussed.