AP1/ATF/CREのような部位に並置された単一の上流のグルココルチコイド応答要素は、トランスフェクトされた網膜で鶏肉グルタミンシンテターゼ遺伝子ホルモン誘導性をレンダリングします

チキングルタミンシンテターゼ遺伝子のグルココルチコイド誘導性を媒介するシス作用元素が同定されています。無傷の胚性鶏肉網膜とL6筋芽細胞を使用したトランスフェクション研究は、グルタミンシンテターゼ転写スタート部位の上流の1,849〜2,120ヌクレオチドの間に位置する配列が、クロマンフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のホルモン誘導性発現を達成するために必要であることを示しています。さらに、この領域からの42ヌクレオチドフラグメントは、SV40初期プロモーターから約2キロ塩基を配置すると、堅牢なホルモン誘導を提供します。12ヌクレオチドコンセンサスのグルココルチコイド応答要素と共通の8つのヌクレオチドを含む配列が、この要素内にエンコードされています。DNase Iフットプリント実験では、このコンセンサスシーケンスが誘導に必要なDNA内のグルココルチコイド受容体の唯一の結合部位を提供することを確認します。フットプリント領域の外側にマッピングされる8ヌクレオチドの除去は、L6筋芽細胞におけるホルモン応答の減衰と胚網膜の反応の廃止をもたらします。この削除は、標準的なサイクリックAMP応答要素（CRE）、アクティブ化転写因子（ATF）、およびAP1結合部位に似たシーケンスであるシーケンス5'CAGCGTCA3 'を排除します。これらの結果は、グルタミンシンテターゼ転写開始部位の上流2.1キロ塩基で強力なグルココルチコイド誘導を媒介するために、JUN/FOS/ATF/CREBファミリーの転写因子のメンバーと協力して作用することを示唆しています。

The cis-acting element mediating glucocorticoid inducibility of the chicken glutamine synthetase gene has been identified. Transfection studies using intact embryonic chicken retinae and L6 myoblasts demonstrate that sequences located between 1,849 and 2,120 nucleotides upstream of the glutamine synthetase transcription start site are required to achieve hormonally inducible expression of the chloramphenicol acetyltransferase gene. Moreover, a 42-nucleotide fragment from this region provides a robust hormonal induction when positioned approximately 2 kilobases from the SV40 early promoter. A sequence containing 8 nucleotides in common with the 12-nucleotide consensus glucocorticoid response element is encoded within this element. DNase I footprinting experiments confirm that this consensus sequence provides the only binding sites for the glucocorticoid receptor within the DNA required for inducibility. Removal of 8 nucleotides that map outside of the footprinting region results in attenuation of the hormonal response in L6 myoblasts and abolition of the response in embryonic retinae. This deletion eliminates the sequence 5'CAGCGTCA3', a sequence that resembles the canonical cyclic AMP response element (CRE), activating transcription factor (ATF), and AP1 binding sites. These results suggest that the glucocorticoid receptor acts in collaboration with a member of the jun/fos/ATF/CREB family of transcription factors to mediate a strong glucocorticoid induction at a site 2.1 kilobases upstream of the glutamine synthetase transcription start site.