Romanowskyky染料とRomanowsky-giemsa効果5ロマノフスキー・ギエムサ染色の紫色のdna-ab-ey染料複合体の構造調査

2つの染料Azure B（AB）とEosin Y（EY）を含む標準化された染色溶液を使用して、再現可能なRomanowsky-Giemsa染色（RGS）を実行できます。染色後、細胞核はDNA-ab-ey複合体によって生成された紫色の色を持っています。細胞核のマイクロ型は、18,100 cm-1（552 nm）の鋭く強い吸収帯を持ち、いわゆるロマノウスキーバンド（RB）であり、これは染料複合体のEYクロモフォアによるものです。他の吸収帯は、DNAに縛られた腹部に割り当てることができます。ABおよびEYを伴うDNAのその後の染色により、人工DNA-ab-ey複合体は細胞の外側に調製できます。染色実験の最初のステップでは、1：1組成のマイクロスライドに青色DNA-AB複合体の薄膜を調製しました。核酸の各アニオン性ホスホジエステル残基は、1つの存在によって占有されました。色素製剤の微小栄養測定法は、モノマーと二量体に加えて、主により高いAB凝集体が静電的および疎水性相互作用によってDNAに結合していることを示しました。これらのDNA-AB複合体は水に不溶です。したがって、DNA-ABフィルムを水溶液で染色し、染色実験の2番目のステップで不溶性DNA-ABEYフィルムを調製することも可能でした。EYとの反応の後、色素製剤内の薄い部位は紫色でした。紫色の斑点のマイクロスペラは、18,100 cm-1の強力なロマノウスキーバンドを示しています。特別な手法を使用して、紫色の染料複合体の組成を推定することが可能でした。2つの染料の比率は、約1：3のAB：ABでした。EYアニオンは、主に電気中性DNA-AB複合体のABフレームワークとの疎水性相互作用によって結合されています。EY吸収は、EYとDNA-AB-EYのABフレームワークとの相互作用により、赤くシフトされます。この赤方偏移は、結合したey dianionsの誘電体分極によって引き起こされると仮定します。DNA-AB複合体のDNA鎖は、優先方向kで機械的に整列できます。マイクロスライドに調製された高配向染料複合体は、燃え上がり、二色でした。オリエンテーションは、その後のEY溶液による染色中に維持されます。このようにして、マイクロスライドに高度に向いた紫色のDNA-ab-ey複合体を準備しました。両方のタイプの色素錯体の軽い吸収は、偏光子と分析器を備えた微小糖栄養計によって研究されました。色素製剤内の最高の方向のサイトは、複屈折の品質に応じて交差ニコルの下で選択されました（400語で切り捨てられた要約）

A reproducible Romanowsky-Giemsa staining (RGS) can be carried out with standardized staining solutions containing the two dyes azure B (AB) and eosin Y (EY). After staining, cell nuclei have a purple coloration generated by DNA-AB-EY complexes. The microspectra of cell nuclei have a sharp and intense absorption band at 18,100 cm-1 (552 nm), the so called Romanowsky band (RB), which is due to the EY chromophore of the dye complexes. Other absorption bands can be assigned to the DNA-bound AB cations. Artificial DNA-AB-EY complexes can be prepared outside the cell by subsequent staining of DNA with AB and EY. In the first step of our staining experiments we prepared thin films of blue DNA-AB complexes on microslides with 1:1 composition: each anionic phosphodiester residue of the nucleic acid was occupied by one AB cation. Microspectrophotometric investigations of the dye preparations demonstrated that, besides monomers and dimers, mainly higher AB aggregates are bound to DNA by electrostatic and hydrophobic interactions. These DNA-AB complexes are insoluble in water. Therefore it was possible to stain the DNA-AB films with aqueous EY solutions and also to prepare insoluble DNA-AB-EY films in the second step of the staining experiments. After the reaction with EY, thin sites within the dye preparations were purple. The microspectra of the purple spots show a strong Romanowsky band at 18,100 cm-1. Using a special technique it was possible to estimate the composition of the purple dye complexes. The ratio of the two dyes was approximately EY:AB approximately 1:3. The EY anions are mainly bound by hydrophobic interaction to the AB framework of the electrical neutral DNA-AB complexes. The EY absorption is red shifted by the interaction of EY with the AB framework of DNA-AB-EY. We suppose that this red shift is caused by a dielectric polarization of the bound EY dianions. The DNA chains in the DNA-AB complexes can mechanically be aligned in a preferred direction k. Highly oriented dye complexes prepared on microslides were birefringent and dichroic. The orientation is maintained during subsequent staining with aqueous EY solutions. In this way we also prepared highly orientated purple DNA-AB-EY complexes on microslides. The light absorption of both types of dye complexes was studied by means of a microspectrophotometer equipped with a polarizer and an analyser. The sites of best orientation within the dye preparations were selected under crossed nicols according to the quality of birefringence.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)