アルツハイマー病前駆体タンパク質mRNAの5'UNTranslisted領域を標的とするハイスループットの薬物スクリーニング

著者らは、アルツハイマー病（AD）に効果的な治療薬を特定するための新しいアプローチを採用しました。ADアミロイド前駆体タンパク質（APP）のmRNAの5'Untranslisted領域（5'utr）は、中枢神経系におけるAPPホロタンパク質およびアミロイドベータ（ABETA）ペプチドのレベルの重要な調節因子です。著者らは、ウイルス性内リボソーム侵入部位によって駆動される146ヌクレオチドAPP mRNA 5'utrおよび緑色蛍光タンパク質（GFP）の翻訳制御下でルシフェラーゼを発現する安定した神経芽細胞腫SH-SY5Yトランスフェクタントを生成しました。ハイスループットスクリーン（HTS）を使用して、Luciferase ReporterのAPP mRNA 5'UTR制御翻訳に関する神経変性に関する生物発見のための研究室ライブラリー（LDDN）から得られた110,000の化合物の効果をスクリーニングしました。このスクリーニングは、安定したSH-SY5YトランスフェクタントのGFP発現に影響を与えなかったAPP mRNA 5'UTR駆動型ルシフェラーゼのいくつかの非毒性特異的阻害剤をもたらしました。さらに、これらの化合物は、プリオンタンパク質（PRP）mRNA 5'utrによって制御されたルシフェラーゼレポーターの発現をはるかに低い程度に阻害または阻害しませんでした。SH-SY5Y細胞株。この堅牢で具体的な高度なHTSから得られたヒットは、ADのアプリ翻訳とABETAの生産を制限するために、有用な将来の治療薬に発展する可能性のあるエージェントを特定するために特徴付けられます。

The authors employed a novel approach to identify therapeutics effective in Alzheimer disease (AD). The 5'untranslated region (5'UTR) of the mRNA of AD amyloid precursor protein (APP) is a significant regulator of the levels of the APP holoprotein and amyloid beta (Abeta) peptide in the central nervous system. The authors generated stable neuroblastoma SH-SY5Y transfectants that express luciferase under the translational control of the 146-nucleotide APP mRNA 5'UTR and green fluorescent protein (GFP) driven by a viral internal ribosomal entry site. Using a high-throughput screen (HTS), they screened for the effect of 110,000 compounds obtained from the library of the Laboratory for Drug Discovery on Neurodegeneration (LDDN) on the APP mRNA 5'UTR-controlled translation of the luciferase reporter. This screening yielded several nontoxic specific inhibitors of APP mRNA 5'UTR-driven luciferase that had no effect on the GFP expression in the stable SH-SY5Y transfectants. Moreover, these compounds either did not inhibit or inhibited to a much lower extent the expression of the luciferase reporter regulated by a prion protein (PrP) mRNA 5'UTR, used as an alternative mRNA structure to counterscreen APP mRNA 5'UTR in stably transfected SH-SY5Y cell lines. The hits obtained from this robust, specific, and highly quantitative HTS will be characterized to identify agents that may be developed into useful future therapeutic agents to limit APP translation and Abeta production for AD.