TEX101遺伝子の5'-Flanking領域のゲノム組織と構造：代替プロモーターの使用とスプライシングは、異なる5'-非翻訳領域で転写産物のバリアントを生成します

新規生殖細胞特異的抗原であるTex101（TES101反応性タンパク質）は、マウス精巣細胞に向けたモノクローナル抗体を使用して以前に同定されました。Tex101は、生殖細胞の原形質膜上に特異的に位置し、生殖腺器官でのその発現は性的に二形性です。遺伝子発現を指示する基本的なメカニズムを理解するために、TEX101のゲノム組織が研究されました。遺伝子は、それぞれ5つの翻訳されたエクソン（エクソン2〜6）と3つの5'-非翻訳エクソン（エクソン1a、1b、および1c）で構成されています。TEX101は、3つの5'に翻訳されたエクソンの使用によって分類される3つの主要な転写産物を形成します。TEX101 mRNAの1つの形式は、エクソン1cから転写され、エクソン2の共通アクセプターサイトにスプライスされます。転写産物の2番目の形式では、エクソン1aはエクソン1bとエクソン2に連続的にスプライスされます。エクソン1aからエクソン2へのスプライシングは、転写産物の3番目の形式が生じます。逆転写（RT） - ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）分析により、精巣と卵巣の間のTEX101転写産物の微分発現パターンが示されました。転写-1の発現は雄と雌のgonadで構成的であるのに対し、転写-2と-3は精子形成の開始後にのみ検出されます。不死化マウス精巣細胞からの細胞株であるGC-2SPD（TS）細胞を使用したルシフェラーゼレポーターアッセイは、エクソン1Cの5'フランキング配列がエクソン1aよりも高いプロモーター活性を持っていることを示しました。キメラ構造の削除分析は、遺伝子発現に不可欠な配列が、5つのCAATボックスのクラスターが配置されている-3186と+14の間の5'Flanking領域に存在することを示しました。まとめると、これらの発見は、配偶子形成中のTEX101発現の調節の理解を促進するはずです。

A novel germ cell-specific antigen, TEX101 (TES101-reactive protein), was previously identified using a monoclonal antibody directed against mouse testicular cells. TEX101 is specifically located on the plasma membrane of germ cells, and its expression in gonadal organs is sexually dimorphic. To understand the fundamental mechanism directing gene expression, the genomic organization of TEX101 was studied. The gene consists of five translated exons (exons 2-6) and three 5'-untranslated exons (exon 1a, 1b, and 1c), respectively. TEX101 forms three major transcripts classified by usage of the three 5'-untranslated exons. One form of TEX101 mRNA is transcribed from exon 1c and spliced to the common acceptor site in exon 2. In the second form of the transcript, exon 1a is spliced to exon 1b and exon 2 in a sequential manner. Splicing from exon 1a to exon 2, arises the third form of transcript. Reverse Transcription (RT)-polymerase chain reaction (PCR) analysis demonstrated differential expression pattern of the TEX101 transcripts between testis and ovary. Whereas the expression of transcript-1 is constitutive in male and female gonads, the transcript-2 and -3 are detected only after starting of the spermatogenesis. Luciferase reporter assays using GC-2spd(ts) cells, a cell line from immortalized mouse testicular cells, showed that the 5'-flanking sequence of exon 1c has higher promoter activity than exon 1a. Deletion analysis of the chimeric structures indicated that sequences essential to gene expression are present on the 5'-flanking region between -3186 and +14, where the cluster of five CAAT boxes is located. Taken together, these findings should facilitate an understanding of the regulation of TEX101 expression during gametogenesis.