クルクミンは、ヒト膠芽腫T98G細胞のアポトーシスのための受容体媒介性およびミトコンドリア媒介タンパク質分解経路の両方を活性化しました

クルクマロンガの根茎のポリフェノール化合物であるクルクミン（CCM）の治療効果は、膠芽腫ではまだ検査されていません。ヒト膠芽腫T98G細胞を使用して、アポトーシスを誘導し、このプロセスに関与するタンパク質分解メカニズムを特定するためのCCMの有効性を調査しました。トリパンブルー染料除外試験では、CCMの用量が増加すると細胞生存率の低下が示されました。ライト染色とアポプタグアッセイは、それぞれ25ミクロムおよび50ミクロームのCCMに24時間露出したT98G細胞におけるアポトーシスの形態学的および生化学的特徴を示しました。ウエスタンブロッティングとしてのCCM活性化受容体を介したアポトーシスの治療により、カスパーゼ-8の活性化とTBIDへのBIDの切断が示されました。さらに、CCMはBAX：Bcl-2比、およびシトクロムCのミトコンドリア放出、カスパーゼ/直接IAP結合タンパク質の2番目のミトコンドリア活性化因子（SMAC/DIABLO）、およびアポトーシス誘導ファクター（AIF）を示すアポトーシス誘導ファクター（AIF）を示すものと引き起こしました。ミトコンドリア媒介経路の関与も同様です。核因子カッパB（NFKAPPAB）のダウンレギュレーション、核因子カッパBアルファ（イカッパアルファ）の阻害剤の発現の増加、およびアポトーシス阻害剤タンパク質（IAP）やC-IAP2などの発現の減少（IAP）の減少CCM治療後のT98g細胞は、生存シグナルの抑制を示唆しました。カスパーゼ-9およびカスパーゼ-3の活性化は、それぞれ35 kDおよび20 kDの活性フラグメントの生成で検出されました。CalPainおよびCaspase-3活性は、特定の部位で270 kdのアルファセプケリンを切断し、それぞれ145 kd Spectrin分解産物（SBDP）と120 kd SBDPを生成しました。我々の結果は、CCMがT98G細胞におけるアポトーシスの誘導のために受容体媒介およびミトコンドリア媒介性タンパク質分解メカニズムの両方を誘導したことを強く示唆しています。

The therapeutic effect of curcumin (CCM), a polyphenolic compound from the rhizome of Curcuma longa, has not yet been examined in glioblastoma. We used human glioblastoma T98G cells to explore the efficacy of CCM for inducing apoptosis and identifying proteolytic mechanisms involved in this process. Trypan blue dye exclusion test showed decrease in cell viability with increasing dose of CCM. Wright staining and ApopTag assay showed, respectively, morphological and biochemical features of apoptosis in T98G cells exposed to 25 microM and 50 microM of CCM for 24 h. Treatment with CCM activated receptor-mediated pathway of apoptosis as Western blotting showed activation of caspase-8 and cleavage of Bid to tBid. Besides, CCM caused an increase in Bax:Bcl-2 ratio, and mitochondrial release of cytochrome c, Second mitochondrial activator of caspases/Direct IAP binding protein with low pI (Smac/Diablo), and apoptosis-inducing-factor (AIF) indicating involvement of mitochondria-mediated pathway as well. Down regulation of the nuclear factor kappa B (NFkappaB), increased expression of inhibitor of nuclear factor kappa B alpha (IkappaB alpha), and decreased expression of inhibitor-of-apoptosis proteins (IAPs) such as c-IAP1 and c-IAP2 in T98G cells following CCM treatment suggested suppression of survival signal. Activation of caspase-9 and caspase-3 was detected in generation of 35 kD and 20 kD active fragments, respectively. Calpain and caspase-3 activities cleaved 270 kD alpha-spectrin at specific sites to generate 145 kD spectrin break down product (SBDP) and 120 kD SBDP, respectively. Our results strongly suggest that CCM induced both receptor-mediated and mitochondria-mediated proteolytic mechanisms for induction of apoptosis in T98G cells.