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スフィンゴシン1-リン酸（S1P）は、S1P（1-5）に指定された5つのgタンパク質共役細胞表面受容体を特異的に活性化する細胞内および細胞内メッセンジャーです。S1P（1）受容体は、胸腺および二次リンパ器官からのリンパ球の出口を調節することにより、免疫監視の維持に特に重要です。S1Pは、スフィンゴシンキナーゼタイプ1および2によって触媒されるスフィンゴシンのリン酸化によって生成されます。リン酸化もリン酸化し、リンパ球上のS1P（1）受容体の細胞表面発現をダウンレギュレートすることにより、リンパ球減少症を誘導することもできます。リンパ球循環と分布におけるS1Pの役割を分析するために、フィンゴリモド、スフィンゴシン、およびジヒドロリンゴシンを並列検出と定量化とともに、リン酸化誘導体誘導体、フィンゴリモド - リン酸、S1P、およびジヒドリスリン酸塩1Pとともに、高速液体クロマトグラフィーベースの方法を確立しました。- リン酸。リン酸化および非リン酸化脂質は、単純なクロロホルム抽出により、細胞、組織、血清、血漿、培地などの生物学的サンプルから効率的に分離されました。9-フルオレニルメチルクロロホルム酸による蛍光標識により、スフィンゴ脂質検出の高い選択性と感度が向上しました。記載されている方法は、スフィンゴ脂質および類似体のリン酸化、脱リン酸化、加水分解、および脱水和化を調査するための正確なアプローチを提供します。さらに、酵素変換とは独立して機能し、酵素活動ではなく実際の濃度を測定します。
スフィンゴシン1-リン酸（S1P）は、S1P（1-5）に指定された5つのgタンパク質共役細胞表面受容体を特異的に活性化する細胞内および細胞内メッセンジャーです。S1P（1）受容体は、胸腺および二次リンパ器官からのリンパ球の出口を調節することにより、免疫監視の維持に特に重要です。S1Pは、スフィンゴシンキナーゼタイプ1および2によって触媒されるスフィンゴシンのリン酸化によって生成されます。リン酸化もリン酸化し、リンパ球上のS1P（1）受容体の細胞表面発現をダウンレギュレートすることにより、リンパ球減少症を誘導することもできます。リンパ球循環と分布におけるS1Pの役割を分析するために、フィンゴリモド、スフィンゴシン、およびジヒドロリンゴシンを並列検出と定量化とともに、リン酸化誘導体誘導体、フィンゴリモド - リン酸、S1P、およびジヒドリスリン酸塩1Pとともに、高速液体クロマトグラフィーベースの方法を確立しました。- リン酸。リン酸化および非リン酸化脂質は、単純なクロロホルム抽出により、細胞、組織、血清、血漿、培地などの生物学的サンプルから効率的に分離されました。9-フルオレニルメチルクロロホルム酸による蛍光標識により、スフィンゴ脂質検出の高い選択性と感度が向上しました。記載されている方法は、スフィンゴ脂質および類似体のリン酸化、脱リン酸化、加水分解、および脱水和化を調査するための正確なアプローチを提供します。さらに、酵素変換とは独立して機能し、酵素活動ではなく実際の濃度を測定します。
Sphingosine 1-phosphate (S1P) is an extra- and intracellular messenger that specifically activates five G-protein-coupled cell surface receptors designated S1P(1-5). The S1P(1) receptor is particularly important for the maintenance of immune surveillance by regulating egress of lymphocytes from thymus and secondary lymphoid organs. S1P is generated through phosphorylation of sphingosine which is catalyzed by sphingosine kinase types 1 and 2. The immunosuppressant and sphingosine analog Fingolimod (2-amino-2-(2-[4-octylphenyl]ethyl)-1,3-propanediol, FTY720) can also be phosphorylated and induces lymphopenia by downregulating cell surface expression of the S1P(1) receptor on lymphocytes. To analyze the role of S1P in lymphocyte circulation and distribution we established a high-performance-liquid-chromatography-based method for parallel detection and quantification of Fingolimod, sphingosine, and dihydrosphingosine together with their phosphorylated derivatives Fingolimod-phosphate, S1P, and dihydrosphingosine 1-phosphate. Phosphorylated and nonphosphorylated lipids were efficiently isolated from biological samples such as cells, tissues, serum, plasma, and media by simple chloroform extraction. Fluorescence labeling with 9-fluorenylmethyl chloroformiate ensured high selectivity and enhanced sensitivity for sphingolipid detection. The described method provides an accurate approach to investigate phosphorylation, dephosphorylation, hydrolyzation, and dehydrolyzation of sphingolipids and analogs. In addition it works independently from enzymatic conversions, measuring actual concentrations rather than enzymatic activities.
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