Ristocetinとボトロセチンには、血小板膜糖タンパク質IBに結合するためのVon Willebrand因子の2つの異なるドメインが含まれます。

Ristocetinとボトロセチンは、VWF分子の2つの異なるドメインを介して、Von Willebrand因子（VWF）の血小板糖タンパク質Ib（GPIB）への結合を媒介するという証拠があります。これは、モノクローナル抗体（mAb）を使用してVWFおよびVWFの配列に由来する合成ペプチドを使用して確立されました。MAB 322およびMAB NMC/VW4は、次の酵素で得られたVWFのGPIB結合ドメインを含むネイティブVWFと断片を認識します。トリプシン（116 kDa）、V-8プロテアーゼ（SPIII、320 kDa）、V-88プロテアーゼとサブチリシン（33-28 kDa）。それにもかかわらず、VWFへの結合のための競合的阻害の実験における2つのmAb間の相互変位の欠如は、それぞれのエピトープが分離されていることを示しています。両方のmAbは、ristocetinによって誘導される血小板膜GpibおよびVWF依存性血小板凝集に125-VWF結合を阻害します。ただし、MAB NMC/VW4のみがボトロセチンの存在下でこれらの機能を阻害し、リストセケチン誘発性血小板凝集がmAB 322によって阻害されると、ボトロセチンはまだ凝集を回復させることができます。Ristocetinまたはボトロセチンの存在下でGPIBに結合するためのVWFの2つの異なるドメインの関与は、VWFのGPIB結合ドメインに対応する競合他社の合成ペプチドを使用して、125-VWFの血小板への結合の実験で確認されました（CYS 474へのPRO 48888888888888888888およびSer 692からPro 708へ）。2.5 mMの最終濃度では、両方のペプチドがリストセケチン処理された血小板へのVWFの結合の90％以上を阻害しますが、ボトロセチンの存在下でこの結合を変更することはできません。結論として、我々のデータは、ボトロセチンとリストセチンがGPIBに結合するためにVWFの異なる部位を含むことを示唆しています。

We have evidence that ristocetin and botrocetin mediate binding of von Willebrand Factor (vWF) to platelet glycoprotein Ib (GPIb) through two distinct domains on the vWF molecule. This was established by using monoclonal antibodies (MAbs) to vWF and synthetic peptides derived from the sequence of vWF. MAb 322 and MAb NMC/vW4 both recognize native vWF as well as fragments containing the GPIb-binding domain of vWF, obtained with the following enzymes: trypsin (116 kDa), V-8 protease (SpIII, 320 kDa) and V-8 protease plus subtilisin (33-28 kDa). Nevertheless, the lack of reciprocal displacement between the two MAbs in experiments of competitive inhibition for binding to vWF demonstrate that their respective epitopes are separate. Both MAbs inhibit 125I-vWF binding to platelet membrane GPIb and vWF-dependent platelet agglutination induced by ristocetin. However, only MAb NMC/vW4 inhibits these functions in the presence of botrocetin and when ristocetin-induced platelet agglutination is inhibited by MAb 322, botrocetin is still able to restore the agglutination. The involvement of two distinct domains of vWF for binding to GPIb in the presence of ristocetin or botrocetin was confirmed in experiments of binding of 125I-vWF to platelets using a competitor synthetic peptides corresponding to the GPIb binding domain of vWF (Cys 474 to Pro 488 and Ser 692 to Pro 708). At a final concentration of 2.5 mM both peptides inhibit more than 90% of the binding of vWF to ristocetin-treated platelets but are unable to modify this binding in the presence of botrocetin. In conclusion our data suggest that botrocetin and ristocetin involve distinct sites on vWF for binding to GPIb.