重度のカラム過負荷を伴うHPLC-NMR：[14C] -ZD6126で処理したラットおよび犬の尿および胆汁サンプルの高速トラック代謝産物識別

この研究の対象は、i.v。HPLC-NMR分光法により、それぞれ10 mg/kgおよび20 mg/kgで雌胆汁および20 mg/kgのラットと、雄の胆管が6 mg/kgでカニューートした犬に投与しました。ZD6126はリン酸化されたプロドラッグであり、活性代謝物ZD6126フェノールに急速に加水分解されます。ここに示されている結果は、[（14）c] -Zd6126フェノールが雄の犬と雄と雌の両方のラットによって広範囲に代謝されることを示しています。胆汁と尿中の用量の回収は、放射帯層を利用して決定され、犬の排泄経路（93％）として胆道排泄を明らかにし、最初の6時間で両方のバイオ流体で回復した放射能の大部分が回復しました。ラットでは、最初の24時間以内に92％を超える回復が得られました。排泄の主な経路は、最初の12時間以内に胆汁51〜93％を介して行われました。投与されたリン酸化プロドラッグは、排泄物サンプルのいずれでも観察されませんでした。胆汁および尿サンプルの代謝物プロファイルは、放射能検出（HPLC-RAD）を備えた高性能液体クロマトグラフィーによって決定され、各バイオ流体に多くの放射標識成分が明らかになりました。その後、個々の代謝物は、HPLC-NMR分光法とHPLC-MSによって特定されました。雄の犬では、尿と胆汁の主要な成分は[（14）C] -ZD6126フェノールグルクロニドであり、それぞれ用量の3％と77％を占めていました。[（14）c] -Zd6126フェノールは尿中に用量の1％で観察されたが、胆汁では観察されなかった。デメチル化[（14）C] -ZD6126フェノールの硫酸塩コンジュゲートがHPLC-NMRによって胆汁で同定され、HPLC-MSによって確認されました。ラットでは、胆汁には2つの主要な放射標識成分が含まれていました。1つは[（14）c] -Zd6126フェノールグルクロニドとして、もう1つは脱メチル化のグルクロニドコンジュゲートとして特定されました[（14）C] -ZD6126フェノール。ただし、代謝の性差または用量レベルの違いにより、これら2つの成分の割合の顕著な違いが雄ラットと雌ラットの間で観察されました。脱メチル化されたグルクロニドコンジュゲート[（14）C] -ZD6126フェノールは、雄ラットの胆汁に高濃度で存在し（4-34％）、フェノールグルクロニドは雌ラットの胆汁に高濃度で存在していました（8 8は8でした。-70％）0〜6時間の収集期間。3番目の成分は、雄ラットの胆汁サンプル（0〜6時間および6〜12時間）でのみ観察されました。これは、犬の胆汁で観察されたものと同じ脱メチル化された[（14）c] -Zd6126フェノールの硫酸塩のコンジュゲートであると特定されました。ラットの尿は、濃度が大きく変化する2つの主要な代謝物、すなわちデメチル化された[（14）C] -ZD6126フェノールグルクロニドと[（14）C] -ZD6126フェノールのグルクロニドを含んでいた。繰り返しますが、雄ラットと雌ラットの相対量の違いが観察されました。雄ラットの尿中の主要な代謝物は脱メチル化されています[（14）C] -ZD6126フェノール（0-24時間で0-17％）、0〜24時間以上の用量の0.5〜50％を占めるフェノールグルクロニドは、女性の主要な代謝物でした。プールされたバイオ流体サンプルのメタノール抽出物は、主要な代謝物の迅速な識別のためにHPLC-NMRに提出されました。サンプル調製を最小限に抑えて、6〜28 mLのバイオ流体に直接HPLCカラムに直接注入した後、代謝産物は大部分が正常に分離される可能性があります。重度のカラムの過負荷にもかかわらず、[（14）c] -ZD6126の主要な代謝物を積極的に特定することができ、この論文には結果が示されています。

The subject of this study was the determination of the major urinary and biliary metabolites of [(14)C]-ZD6126 following i.v. administration to female and male bile duct cannulated rats at 10 mg/kg and 20 mg/kg, respectively, and male bile duct cannulated dogs at 6 mg/kg by HPLC-NMR spectroscopy. ZD6126 is a phosphorylated pro-drug, which is rapidly hydrolysed to the active metabolite, ZD6126 phenol. The results presented here demonstrate that [(14)C]-ZD6126 phenol is subsequently metabolised extensively by male dogs and both, male and female rats. Recovery of the dose in bile and urine was determined utilising the radiolabel, revealing biliary excretion as the major route of excretion (93%) in dog, with the majority of the radioactivity recovered in both biofluids in the first 6 h. In the rat, greater than 92% recovery was obtained within the first 24 h. The major route of excretion was via the bile 51-93% within the first 12 h. The administered phosphorylated pro-drug was not observed in any of the excreta samples. Metabolite profiles of bile and urine samples were determined by high performance liquid chromatography with radiochemical detection (HPLC-RAD), which revealed a number of radiolabelled components in each of the biofluids. The individual metabolites were subsequently identified by HPLC-NMR spectroscopy and HPLC-MS. In the male dog, the major component in urine and bile was the [(14)C]-ZD6126 phenol glucuronide, which accounted for 3% and 77% of the dose, respectively. [(14)C]-ZD6126 phenol was observed in urine at 1% of dose, but was not observed in bile. A sulphate conjugate of demethylated [(14)C]-ZD6126 phenol was identified in bile by HPLC-NMR and confirmed by HPLC-MS. In the rat, the bile contained two major radiolabelled components. One was identified as the [(14)C]-ZD6126 phenol glucuronide, the other as a glucuronide conjugate of demethylated [(14)C]-ZD6126 phenol. However, a marked difference in the proportions of these two components was observed between male and female rats, either due to a sex difference in metabolism or a difference in dose level. The glucuronide conjugate of the demethylated [(14)C]-ZD6126 phenol was present at higher concentration in the bile of male rats (4-34%), while the phenol glucuronide was present at higher concentration in the bile of female rats (8-70%) over a 0-6 h collection period. A third component was only observed in the bile samples (0-6 h and 6-12 h) of male rats. This was identified as being the same sulphate conjugate of demethylated [(14)C]-ZD6126 phenol as the one observed in dog bile. The rat urines contained two main metabolites in greatly varying concentrations, namely the demethylated [(14)C]-ZD6126 phenol glucuronide and the glucuronide of [(14)C]-ZD6126 phenol. Again, the differences in relative amounts between male and female rats were observed, the major metabolite in the urines from male rats being the demethylated [(14)C]-ZD6126 phenol (0-17% in 0-24 h), whilst the phenol glucuronide, accounting for 0.5-50% of the dose over 0-24 h, was the major metabolite in females. Methanolic extracts of the pooled biofluid samples were submitted for HPLC-NMR for the quick identification of the major metabolites. Following a single injection of the equivalent of 6-28 ml of the biofluids directly onto the HPLC-column with minimal sample preparation, the metabolites could be largely successfully isolated. Despite severe column overloading, the major metabolites of [(14)C]-ZD6126 could be positively identified, and the results are presented in this paper.