合成ペプチドからのトリフルオロアセテート除去に使用される塩酸酸濃度の最適化

トリフルオロ酢酸（CF3COO-、またはTFA）は、ほとんどの場合、商業的に合成されたペプチドに存在します。残念ながら、1673 cm-1に強い赤外線（IR）吸収帯があり、ペプチドのアミドI帯域を大幅に重複させるか、完全に曖昧にしています。そのような場合、ペプチド二次構造の決定にIR吸収分光法を使用できるようにするために、TFAを溶液から除去する必要があります。最も便利で広く使用されている手順には、0.1 M HCl溶液からのペプチド凍結乾燥が含まれます。トリプトファンが豊富な抗菌ペプチドインドリシジンの研究では、このHCl濃度を使用する場合は注意が必要であることがわかりました。高いHCl濃度（緩衝液中は10 mm以上、緩衝溶液で50 mm以上）がペプチド構造を変更し、その熱安定性を低下させる可能性があり、それによりペプチドのその後の構造調査を妨害します。我々の結果は、ペプチド二次構造の修飾なしに、2〜10 mmのHCL濃度が本質的にすべてのTFA不純物を除去するのに十分であることを示しています。

Trifluoroacetate (CF3COO-, or TFA) is almost always present in commercially synthesized peptides. Unfortunately, it has a strong infrared (IR) absorption band at 1673 cm-1, significantly overlapping or even completely obscuring the amide I band of a peptide. In such cases TFA must be removed from the solution in order to be able to use IR absorption spectroscopy for peptide secondary structure determination. The most convenient and widely used procedure involves peptide lyophilization from a 0.1 M HCl solution. In our studies of the tryptophan-rich antimicrobial peptide indolicidin, we have found that caution should be taken when using this HCl concentration. High HCl concentrations (>10 mM in unbuffered solutions and > 50 mM in buffered solutions) may modify the peptide structure and reduce its thermal stability, thereby interfering with subsequent structural investigations of the peptide. Our results indicate that HCl concentrations between 2 and 10 mM are adequate to remove essentially all TFA impurities without any modification of the peptide secondary structure.