効率的な溶解度、大腸菌の包含体として発現したfurococcus furiosusからの組換え細胞外アルファアミラーゼの精製

Pyrococcus furiosus外部細胞のアルファアミラーゼ（PFA）をコードする遺伝子は、P。furiosusゲノムDNAのPCRによって増幅され、大腸菌BL21-コドンPlus（DE3）-RILで高度に発現しました。組換えα-アミラーゼは、主に不溶性包摂体の形で発現しました。この論文では、改良された精製方法が確立されました。包有物体の可溶化は、pH 10.5でブリットン - ロビンソンバッファーで3分間90度C処理によって達成されました。次に、可溶化PFAを希釈し、その後、フェニルセファロースクロマトグラフィーによって精製しました。新しい浄化法の全体的な収量は約58,000 U/g湿潤細胞であり、これは以前に報告されたよりも高かった。

The gene encoding the Pyrococcus furiosus extracellular alpha-amylase (PFA) was amplified by PCR from P. furiosus genomic DNA and was highly expressed in Escherichia coli BL21-Codon Plus (DE3)-RIL. The recombinant alpha-amylase was mainly expressed in the form of insoluble inclusion bodies. An improved purification method was established in this paper. The solubilization of the inclusion bodies was achieved by 90 degrees C treatment for 3 min in Britton-Robinson buffer at pH 10.5. The solubilized PFA was then diluted and subsequently purified by Phenyl Sepharose chromatography. The overall yield of the new purification method was about 58,000 U/g wet cells, which is higher than previously reported.