亜急性硬化性パン脳炎脳由来組換え抗体を伴うランダムペプチドライブラリーは、麻疹ウイルスヌクレオカプシドタンパク質のC末端領域の複数のエピトープを識別します。

CNSの感染症および炎症性疾患は、多くの場合、多くの場合、髄腔内免疫グロブリンG（IgG）合成の増加とオリゴクローナルバンドの存在として現れる堅牢なB細胞応答によって特徴付けられます。以前は、レーザーキャプチャマイクロディセクションとシングルセルPCRを使用して、亜急性硬化性パン脳炎（SSPE）の患者の脳からの血漿細胞のIgG変数領域を分析しました。SSPE脳血漿細胞クローンに由来する8つのヒトIgG1組換え抗体（RAB）は、麻疹ウイルス（MV）ヌクレオカプシドタンパク質を認識し、主に疾患を引き起こす薬剤の抗体標的の抗体反応を確認しました。この研究では、抗原同定に関する研究の一環として、4つのRABを使用して、ランダムなファージ変形ペプチドライブラリーをプローブして、MVヌクレオカプシドタンパク質内のエピトープをSSPE脳RABと同定できるかどうかを判断しました。SSPE RABの4つすべてが、酵素結合免疫吸着剤アッセイによってパンラブに特異的に反応したファージ分散ペプチド配列を濃縮しました。NCBIタンパク質データベースのBLASTP検索により、MVヌクレオカプシドタンパク質の65 C末端アミノ酸内の3つのペプチドと異なるアミノ酸ストレッチにおける透明なホモロジーが明らかになりました。MVヌクレオカプシドタンパク質のこれらの領域に対するSSPE RABの特異性は、合成ペプチドまたは短いcDNA発現産物に結合することにより確認されました。これらの結果は、多発性硬化症、神経ココイドーシス、またはベーチェット症候群などの未知の病因の中枢神経系炎症性疾患における抗原発見にペプチドスクリーニングを使用する可能性を示しています。

Infectious and inflammatory diseases of the CNS are often characterized by a robust B-cell response that manifests as increased intrathecal immunoglobulin G (IgG) synthesis and the presence of oligoclonal bands. We previously used laser capture microdissection and single-cell PCR to analyze the IgG variable regions of plasma cells from the brain of a patient with subacute sclerosing panencephalitis (SSPE). Five of eight human IgG1 recombinant antibodies (rAbs) derived from SSPE brain plasma cell clones recognized the measles virus (MV) nucleocapsid protein, confirming that the antibody response in SSPE targets primarily the agent causing disease. In this study, as part of our work on antigen identification, we used four rAbs to probe a random phage-displayed peptide library to determine if epitopes within the MV nucleocapsid protein could be identified with SSPE brain rAbs. All four of the SSPE rAbs enriched phage-displayed peptide sequences that reacted specifically to their panning rAb by enzyme-linked immunosorbent assay. BLASTP searches of the NCBI protein database revealed clear homologies in three peptides and different amino acid stretches within the 65 C-terminal amino acids of the MV nucleocapsid protein. The specificities of SSPE rAbs to these regions of the MV nucleocapsid protein were confirmed by binding to synthetic peptides or to short cDNA expression products. These results indicate the feasibility of using peptide screening for antigen discovery in central nervous system inflammatory diseases of unknown etiology, such as multiple sclerosis, neurosarcoidosis, or Behcet's syndrome.