ヒト胎盤絨毛軟骨細胞株（JAR）における高親和性セロトニン輸送体の発現および周期的なAMP依存的調節

JARヒト胎盤絨毛軟骨細胞株はセロトニンを輸送し、濃度勾配に対して細胞内にモノアミンを蓄積します。輸送はNaCl勾配によって通電されます。三環式（イミプラミンおよびデシプラミン）および非環状（パロキセチンおよびフルオキセチン）抗うつ薬は輸送体を著しく阻害しますが、レセルピンと5-ヒドロキシトリプトファンはそうではありません。膜貫通Na+勾配を減少または廃止するウアベイン、グラミシジン、およびニゲリシン、および細胞へのグルコース輸送を妨げるフロリジンは、輸送を阻害します。グルコースを含まない培地との細胞のプレインキュベーションも同様の阻害を引き起こします。この細胞株におけるセロトニン輸送体の活性は、コレラ毒素（0.1〜1,000 ng/ml）の濃度の増加とともに一晩（16時間）インキュベーションに応じて刺激されます。これらの条件下では、刺激は10 ng/mLコレラ毒素（3.1 +/- 0.2倍）で最大です。コレラ毒素は、これらの細胞のcAMP含有量を2時間以内に数百倍に増加させます。イソブチルメチルキサンチン（100ミクロム）、ジブリルcAMP（100ミクロム）、およびフォルスコリン（100ミクロム）は、コレラ毒素の作用を模倣し、セロトニントランスポーター活性の1.6-2.5倍の刺激を誘発します。コレラ毒素の刺激効果は、50ミクロムN-（2-アミノエチル）-5-イソキノリンスルホンアミドであるプロテインキナーゼ阻害剤と同時にインキュベーションすることにより、有意に拮抗されます。同様の条件下でコレラ毒素が3-O-メチル-D-グルコース輸送を阻害し、この細胞株のタウリン輸送に影響を与えないため、セロトニン輸送に対するコレラ毒素の効果は特異的です。コレラ毒素処理後の細胞のタンパク質含有量にも有意な変化はありません。速度論的分析により、コレラ毒素が最大速度の増加（7.89 +/- 0.67から17.55 +/- 1.06 pmol/mgのタンパク質/5分）を引き起こし、Michaelis-Menten定数（0.52 +/- 0.09に減少することが明らかになりました（0.52 +/- 0.090.29 +/- 0.04 microM）。これらのデータは、JARヒト胎盤絨毛軟骨細胞株が、抗うつ薬による阻害に敏感な高親和性セロトニン輸送体を発現し、トランスポーターの活性がcAMP依存の調節に基づいていることを示しています。

The JAR human placental choriocarcinoma cell line transports serotonin, accumulating the monoamine inside the cell against a concentration gradient. The transport is energized by an NaCl gradient. Tricyclic (imipramine and desipramine) and non-tricyclic (paroxetine and fluoxetine) antidepressants inhibit the transporter markedly, but reserpine and 5-hydroxytryptophan do not. Ouabain, gramicidin, and nigericin, which reduce or abolish the transmembrane Na+ gradient, and phloridzin, which interferes with glucose transport into the cells, inhibit the transport. Preincubation of the cells with glucose-free medium also causes similar inhibition. The activity of the serotonin transporter in this cell line is stimulated in response to overnight (16-h) incubation with increasing concentrations of cholera toxin (0.1-1,000 ng/ml). Under these conditions the stimulation is maximal at 10 ng/ml cholera toxin (3.1 +/- 0.2-fold). Cholera toxin increases the cAMP content of these cells by several hundredfold within 2 h. Isobutylmethylxanthine (100 microM), dibutyryl cAMP (100 microM), and forskolin (100 microM) mimic the action of cholera toxin, eliciting a 1.6-2.5-fold stimulation of the serotonin transporter activity. The stimulatory effect of cholera toxin is antagonized significantly by simultaneous incubation of the cells with 50 microM N-(2-aminoethyl)-5-isoquinolinesulfonamide, a protein kinase inhibitor. The effect of cholera toxin on serotonin transport is specific because, under similar conditions, cholera toxin inhibits 3-O-methyl-D-glucose transport and does not influence taurine transport in this cell line. There is also no significant change in the protein content of the cells after cholera toxin treatment. Kinetic analysis reveals that cholera toxin causes an increase in the maximal velocity (7.89 +/- 0.67 to 17.55 +/- 1.06 pmol/mg of protein/5 min) and a decrease in the Michaelis-Menten constant (0.52 +/- 0.09 to 0.29 +/- 0.04 microM). These data show that the JAR human placental choriocarcinoma cell line expresses a high affinity serotonin transporter that is sensitive to inhibition by antidepressants and that the activity of the transporter is under cAMP-dependent regulation.