副甲状腺ホルモンのプロテインキナーゼC活性化ドメイン

PTHは、アデニル酸シクラーゼと、膜関連プロテインキナーゼ-C（PKC）活性を増加させるメカニズムの両方を活性化します。ホルモンのPKC活性化ドメインを定義するために、PTHフラグメントとROS 17/2ラットの骨肉腫細胞のパネルを標的細胞として使用しました。PTHは、1〜50 pmから5-50 nmの生理学的濃度でのROS 17/2細胞膜のPKC活性を等しく最大に増加させましたが、50 nmを超える中間濃度または濃度ではありませんでした。PKC刺激のピコモル濃度のPTHは、ROS 17/2細胞のアデニル酸シクラーゼを刺激しませんでしたが、PKC刺激ナノモル濃度のホルモンは、EC50が1〜2 nmでアデニル酸シクラーゼを刺激しました。膜PKC活性を増加させなかった100 nmなどの非常に高濃度のPTHは、アデニル酸シクラーゼを最大限に刺激することができました。アデニル酸シクラーゼの活性化に必要なN末端アミノ酸を欠くPTHフラグメントは、膜PKC活性を増加させ、PKC活性化ドメインはPTH分子の28〜34領域内にあることがわかりました。これは、ヒトPTH-（28-34）フラグメント自体の最適に有効なピコモル濃度が、無傷のPTH-の最適な有効なピコモル濃度と同程度に膜関連PKC活性を増加させることができることを示すことによって確認されました（1-84）またはより大きなpth-（1-34）またはpth-（3-34）フラグメント。

The PTH activates both adenylate cyclase and a mechanism that increases membrane-associated protein kinase-C (PKC) activity. To define the hormone's PKC activation domain we have used a panel of PTH fragments and ROS 17/2 rat osteosarcoma cells as the target cells. PTH equally and maximally increased PKC activity in ROS 17/2 cell membranes at physiological concentrations between 1-50 pM and 5-50 nM, but not at intermediate concentrations or concentrations above 50 nM. The PKC-stimulating picomolar concentrations of PTH did not stimulate adenylate cyclase in ROS 17/2 cells, while the PKC-stimulating nanomolar concentrations of the hormone did stimulate adenylate cyclase, with an EC50 of 1-2 nM. Very high concentrations of PTH, such as 100 nM, that did not increase membrane PKC activity were still able to maximally stimulate adenylate cyclase. PTH fragments lacking the N-terminal amino acids needed for adenylate cyclase activation increased membrane PKC activity, and the PKC activation domain was found to lie within the 28-34 region of the PTH molecule. This was confirmed by showing that optimally effective picomolar concentrations of the human PTH-(28-34) fragment itself were able to increase membrane-associated PKC activity to the same extent as the optimally effective picomolar concentrations of the intact PTH-(1-84) or the larger PTH-(1-34) or PTH-(3-34) fragments.