in vitroで相同組換えを利用して、SLICを介して組換えDNAを生成する

in vitroの相同組換えと一本鎖アニーリングを使用して、単一の反応で複数のDNAフラグメントのアセンブリを可能にする新しいクローニング方法、シーケンス、およびライゲンス非依存性クローニング（SLIC）について説明します。in in in in inucleaseで生成されたssDNAオーバーハングに依存してin initsとベクターフラグメントに依存することにより、in vivoの相同組換え、およびin vitroでの組換えによるこれらのフラグメントのアセンブリを模倣します。SLICインサートは、不完全なPCR（IPCR）または混合PCRで準備することもできます。SLICは、最大5と10のフラグメントを同時に、組換えDNAの効率的で再現可能な組み立てを可能にします。SLICは、RECAと組み合わせて相同組換えを触媒すると、非常に低いDNA濃度で従来の方法と機能の配列要件をより効率的に回避します。この柔軟性により、合成生物学の目的のために、組換えDNAの生成においてはるかに大きな汎用性が可能になります。

We describe a new cloning method, sequence and ligation-independent cloning (SLIC), which allows the assembly of multiple DNA fragments in a single reaction using in vitro homologous recombination and single-strand annealing. SLIC mimics in vivo homologous recombination by relying on exonuclease-generated ssDNA overhangs in insert and vector fragments, and the assembly of these fragments by recombination in vitro. SLIC inserts can also be prepared by incomplete PCR (iPCR) or mixed PCR. SLIC allows efficient and reproducible assembly of recombinant DNA with as many as 5 and 10 fragments simultaneously. SLIC circumvents the sequence requirements of traditional methods and functions much more efficiently at very low DNA concentrations when combined with RecA to catalyze homologous recombination. This flexibility allows much greater versatility in the generation of recombinant DNA for the purposes of synthetic biology.