化学的に反応性の中間体への薬物の代謝活性化のin vivoの可能性の予測：ラットおよびヒトにおけるin vitroおよびin vivo生成の反応性中間体およびin vitroグルタチオン共役形成の相関

高分子への反応性中間体の共有結合結合は、重度の有害薬物反応に潜在的な関与をもたらす可能性があります。したがって、深刻な毒性を避けるために、創薬の初期段階では、反応性代謝物の定量化が必要です。この研究では、ラットとヒトの肝臓ミクロソームにおける共有結合結合とグルタチオン（GSH）コンジュゲート形成の関係を、肝毒性として報告されているか、反応性中間体に由来する他の毒性を有する10の代表的な放射性化合物を使用して調査されました。、クロザピン、ジクロフェナク、フロセミド、イミプラミン、インドメタシン、イソニアジド、およびチエニル酸、すべて10ミクロム濃度。GSHコンジュゲート形成速度は、放射能の共有結合結合（ラットとヒトの両方、R2 = 0.93）とよく相関しています。これは、GSHコンジュゲートの定量化を使用して共有結合を推定できることを示唆しています。in vitroで非ラジオラベル化合物によるGSH結合率を定量化するために、Radio-HPLCによる35S-GSHを使用したGSHコンジュゲート形成の決定のための検証研究は、代謝活性化を予測するのに役立ちました。ラットへの放射標識化合物の20 mg/kgの経口投与後、血漿および肝タンパク質に共有結合した放射能が決定されました。濃度曲線（AUC）およびin vitro共有結合結合速度の下でのプラズマ面積の遊離画分に基づく肝臓の生体内最大共有結合結合レベルは、ウェルと相関することがわかりました（R2 = 0.79）。したがって、ヒトおよびラットおよびin vivoラット研究におけるin vitro共有結合結合研究のこのモデルは、化合物のヒト代謝活性化の予測に役立つ可能性があります。

The covalent binding of reactive intermediates to macromolecules might have potential involvement in severe adverse drug reactions. Thus, quantification of reactive metabolites is necessary during the early stage of drug discovery to avoid serious toxicity. In this study, the relationship between covalent binding and glutathione (GSH) conjugate formation in rat and human liver microsomes were investigated using 10 representative radioactive compounds that have been reported as hepatotoxic or having other toxicity derived from their reactive intermediates: acetaminophen, amodiaquine, carbamazepine, clozapine, diclofenac, furosemide, imipramine, indomethacin, isoniazid, and tienilic acid, all at a concentration of 10 microM. The GSH conjugate formation rate correlates well with the covalent binding of radioactivity (both rat and human, r2 = 0.93), which suggests that quantification of the GSH conjugate can be used to estimate covalent binding. To quantify the GSH-conjugation rate with non-radiolabeled compounds in vitro, the validation study for the determination of GSH conjugate formation using 35S-GSH by radio-HPLC was useful to predict metabolic activation. Following oral administration of 20 mg/kg of the radiolabeled compounds to rats, radioactivity that covalently bound to plasma and liver proteins was determined. The in vivo maximum covalent binding level in liver based on the free fraction of plasma area under the concentration curve (AUC) and in vitro covalent binding rate was found to correlate well (r2 = 0.79). Therefore, this model for in vitro covalent binding studies in human and rat and in vivo rat studies might be useful in predicting human metabolic activation of compounds.