「特異的な」チロシンキナーゼ阻害剤ゲニスチンは、アナンダミドの酵素加水分解を阻害します：アナンダミドの取り込みへの影響

背景と目的：アナンダミドの細胞吸収は、脂肪酸アミドヒドロラーゼ（FAAH）の阻害剤とエンドサイトーシスメカニズムを破壊する薬剤によって減少します。ただし、これらのイベントが同じ時間枠で発生するかどうか、および異なるセルで同程度に発生するかどうかは明らかではありません。したがって、異なるアッセイのインキュベーション時間と温度を使用して、異なる起源の3つの細胞株におけるそのような化合物の影響を調査しました。 実験的アプローチ：アナンダミドのFAAH活性と細胞摂取は、分子のエタノールアミンまたはアラキドノイル部分のいずれかで無線標識されたアナンダミドを使用して測定されました。 主な結果：FAAH阻害剤URB597は、インキュベーション時間4分で、C6神経膠腫、RBL2H3好塩基性白血病細胞、およびp19胚癌細胞へのアナンダミドの取り込みを阻害しました。ただし、URB597治療後、時間依存および温度に敏感な残留摂取が残っていました。プロゲステロンとニスタチンの組み合わせにより、取り込みが減少しましたが、ウェルによって保持されるアナンダミドの量も減少しました。ゲニステインは、urb597のそれに加えていない方法でアナンダミドの取り込みを阻害しました。しかし、ゲニステインはFAAHの強力な競合阻害剤でした（K（I）値8 microM）。 結論と意味：ゲニステインによるアナンダミド取り込みの減少は、チロシンキナーゼの阻害と重複する効力でFAAHを阻害する能力によって説明できます。AnandamideのFAAH-耐性が時間依存している摂取は、研究された3つの細胞株すべてに見られ、したがって、おそらく一般的に発生するプロセスです。

BACKGROUND AND PURPOSE: The cellular uptake of anandamide is reduced by inhibitors of fatty acid amide hydrolase (FAAH) and by agents disrupting endocytotic mechanisms. However, it is not clear if these events occur over the same time frame and if they occur to the same extent in different cells. We have therefore investigated the effects of such compounds in three cell lines of different origins using different assay incubation times and temperatures. EXPERIMENTAL APPROACH: FAAH activity and cellular uptake of anandamide was measured using anandamide, radio-labelled either in the ethanolamine or arachidonoyl part of the molecule. KEY RESULTS: The FAAH inhibitor URB597 inhibited the uptake of anandamide into C6 glioma, RBL2H3 basophilic leukaemia cells and P19 embryonic carcinoma cells at incubation time 4 min. However, a time-dependent and temperature-sensitive residual uptake remained after URB597 treatment. The combination of progesterone and nystatin reduced the uptake, but also decreased the amount of anandamide retained by the wells. Genistein inhibited anandamide uptake in a manner that was not additive to that of URB597. However, genistein was a potent competitive inhibitor of FAAH (K(i) value 8 microM). CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS: The reduction of anandamide uptake by genistein can be explained by its ability to inhibit FAAH with a potency which overlaps that for inhibition of tyrosine kinase. The FAAH- resistant but time-dependent uptake of anandamide is seen in all three cell lines studied and is thus presumably a generally occurring process.